牡丹ISSR-PCR反应体系正交优化设计

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以“凤丹”(Paeonia ostii)基因组DNA为模板。采用正交试验设计方法,研究牡丹ISSR反应体系的影响因素,建立了适合牡丹的ISSR反应体系应程序。10μl反应体系为:1xK应缓冲液。2.5mmol/L Mg^2+,0.4mmol/L dNTPs,1.0U Taq聚合酶,0.75μmol/L.引物。10-20ng模板DNA。反应程序为:94℃预变性3min;94℃变性45s,45-60℃(不同引物退火温度各异)复性45s.72℃延伸90s。35个循环;72℃延伸7min;4℃保存。通过梯度退火试
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