论文部分内容阅读
该实验研究汉黄芩苷对抗炎改善肝细胞胰岛素抵抗（IR）的降糖作用及相关抗炎分子机制。1×10-9mol·L-1胰岛素和3.75×10-6 mol·L-1地塞米松联合诱导48 h,建立稳定IR-HepG2细胞模型。采用葡萄糖氧化酶法在不同时间点（30,36,48,54 h）检测1,5,10,20,50μmol·L-1汉黄芩苷干预IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量的变化,确定最佳起效时间点;蒽酮法检测细胞内糖原含量;CCK-8法检测各浓度汉黄芩苷对细胞活力的影响;Western blot法分别检测IR-HepG2细胞炎症小体隐热蛋白3（NLRP3）、细胞因子信号转导抑制蛋白3（SOCS3）、Toll样受体4（TLR4）、核转录因子-αB（NF-αB）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、瘦素（leptin）、瘦素受体（Ob-R）、磷酸化胰岛素受体底物2[p-IRS2 （Ser731）]、胰岛素受体底物2（IRS2）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶p85[p-PI3K（Tyr607）]、磷脂酰肌醇3-激酶p85[PI3K（p85）]、磷酸化蛋白激酶B[p-Akt（Ser473）]、蛋白激酶B（Akt）和葡萄糖转运蛋白1/2/4（GLUT1/2/4）的蛋白含量。结果显示,与IR模型组比较,20和50μmol·L-1汉黄芩苷明显上调IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量（分别为P<0.05和P<0.001）;最佳起效时间点为48 h。20和50μmol·L-1汉黄芩苷干预48 h增加IR-HepG2细胞糖原含量,且50μmol·L-1差异极其显著（P<0.001）。各浓度汉黄芩苷对细胞活力均没有明显影响。汉黄芩苷明显抑制炎症通路中重要核转录因子NLRP3,SOCS3,TLR4和NF-κB,并减弱下游炎症效应因子IL-1β,IL-6和TNF-α的表达。除此之外,汉黄芩苷下调受SOCS3调控的leptin水平,激活胰岛素降糖通路中Ob-R,IRS2,p-PI3K/PI3K（p85）,p-Akt/Akt和GLUT1/2/4蛋白质表达。结论汉黄芩苷可促进HepG2细胞葡萄糖摄取和增加糖原合成改善肝IR,其降糖机制可能与调控NLRP3/SOCS3-TLR4-NF-κB炎症通路降低肝IR细胞炎症因子表达,激活胰岛素降糖通路来加强葡萄糖摄取和利用相关。