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原位杂交(in situ hybridization,ISH)的敏感性和杂交效率取决于如下几个方面:①探针的类型和杂交条件;②检测方法的敏感性;③组织的保存和固定。前两点所涉及的内容已有许多的文献报道。mRNA ISH的成功与否,组织的保存和固定相当关键,尤其要重视固定的时间和固定液的pH值。理想的固定应该可以防止组织细胞内mRNA丢失,探针能顺利到达靶RNA,并与之结合。ISH一般均用多聚甲醛固定组织。以使蛋白质上氨基快速发生交联,从而达到防止靶mRAN的丢失。