整合素β4调控脑血管发育

来源 :中山大学学报(医学科学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户:csincis
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【目的】探讨整合素β4(ITGB4)对脑血管生长发育的调控作用。【方法】通过逆转录PCR(RT-PCR)检测靶向itgb4 mRNA序列的吗啉环(MO)在斑马鱼胚胎中的敲低效果。利用体视显微镜和激光共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)观察抑制itgb4表达后,斑马鱼胚胎脑部血管的发育变化。通过在斑马鱼胚胎中注射4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)染料检测血脑屏障(BBB)发育的完整性。使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在永生化人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)中敲低ITGB4,用蛋白免疫印迹(WB)检测其敲低效果。通过活细胞成像分析仪(IncuCyte?)、基质胶(Matrigel?matrix)成管实验和transwell迁移实验分别检测ITGB4在hCMEC/D3中调控细胞增殖、成管和迁移的作用。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测敲低itgb4后Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达变化。【结果】在斑马鱼胚胎中敲降itgb4引起脑水肿、脑部出血、血脑屏障形成障碍以及后脑血管数量减少等相关表型。细胞实验结果显示,在hCMEC/D3细胞中抑制ITGB4的表达导致细胞增殖减缓,管腔形成减少及迁移能力减弱。此外,qRT-PCR结果表明,在斑马鱼胚胎中敲低itgb4抑制Wnt/β-catenin通路下游靶基因的表达。最后,在hCMEC/D3细胞中敲低ITGB4后,通过添加Wnt/β-catenin通路激活剂(BML-284)能明显挽回迁移减少的表型。【结论】ITGB4通过调节脑血管内皮细胞的增殖、迁移和成管等功能促进脑血管发育并参与调控血脑屏障的形成。
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