【摘 要】
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目的以丙型肝炎病毒(HCV)为例,介绍一种简便快速的RNA定量标准品的制备方法.方法RT-PCR扩增目的片段,产物以pGEM-T载体连接并转化感受态大肠杆菌DH5α,经筛选和测序鉴定,阳性
【机 构】
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南通大学附属医院心血管研究室,南通大学附属医院酶学研究室
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目的以丙型肝炎病毒(HCV)为例,介绍一种简便快速的RNA定量标准品的制备方法.方法RT-PCR扩增目的片段,产物以pGEM-T载体连接并转化感受态大肠杆菌DH5α,经筛选和测序鉴定,阳性质粒体外转录合成cRNA,准确定量后作为标准品.结果RNA标准品具有较大的线性范围(109copies/ml～10 copies/ml),批内和批间重复性也较好,CV分别为1.68%～5.97%和6.40%～10.581%.结论此法制备的RNA标准品具有较好的检测灵敏度和特异性,适合临床推广应用.
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