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摘 要 目的:了解中枢神经系统感染病原菌的分布及耐药状况。方法:采用黑马DL-96细菌鉴定仪进行鉴定及药敏试验。结果:685份脑脊液标本,分离出病原菌143株,阳性率20.88%,其中革兰阳性菌84株(58.74%),革兰阴性菌58株(40.56%),真菌1株(0.70%);耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的检出率分别为72.2%和72.9%,未发现耐万古霉素的葡萄菌、肠球菌,万古霉素、奎奴普丁/达福普汀对革兰阳性球菌均有较高的抗菌活性;革兰阴性菌对常用药物头孢他啶、头孢曲松的敏感性较差,亚胺硫霉素对革兰阴性菌有较好的抗菌活性。结论:中枢神经系统感染最常见的病原菌为凝固酶阴性葡萄球菌。
关键词 脑脊液 病原菌 耐药性
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.15.165
资料与方法
2007年3月～2009年11月送检的脑脊液样本685份,男452例,女233例;年龄2个月～13岁。
病原菌分离、鉴定:以无菌技术采集脑脊液2～3ml立即送检,脑脊液2000转/分离心20分钟,取沉淀物涂片,做革兰染色、墨汁负染色,镜检。根据染色反应及细菌形态特征,可初步提示感染细菌的种类,并报告于临床。用接种环挑取经离心后的沉淀物,分别接种于血琼脂平板、麦康凯琼脂平板及巧克力琼脂平板上,置35℃环境中培养18～24小时,第2天检视,若有细菌生长,分离培养鉴定,弃去脑心浸液肉汤管;若有1～3个凝固酶阴性葡萄球菌生长,脑心浸液肉汤管不混浊,则无需鉴定、药敏试验。离心后的沉淀物接种于装有10ml脑心浸液肉汤管,置35℃环境中培养72小时,每天检视有无细菌生长。若有菌生长,分离培养鉴定。
仪器和试剂:采用黑马DL-96细菌鉴定仪进行鉴定、药敏试验。
方法:按照《临床检验操作规程》第2版的要求分离致病菌[1],用黑马DL-96进行鉴定和药敏。大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC 25923及铜绿假单胞菌ATCC 27853为质控菌株。
ESBLs、MRS、D Test的检测:采用CLSI 2004年推荐的纸片扩散法。用头孢西丁代替笨唑西林。对红霉素耐药而克林霉素敏感的菌株邻近红霉素一边的克林霉素抑菌环出现截平现象(大写D样),为D-试验阳性,即体外诱导型克林霉素耐药。
结 果
病原菌检出率,见表1。
分离菌的耐药分析:①革兰阳性菌对各种抗生素的耐药性:分离出葡萄球菌属72株,其中CNS最多,表皮葡萄球菌47株,其他凝固酶阴性葡萄球菌12株,金黄色葡萄球菌13株,MRSA、MRSCNS的检出率分别为76.9%(10/13)、72.9%(43/59)。未发现对万古霉素耐药或中介的葡萄球菌,对奎奴普丁/达福普汀耐药率为6.6%。5株红霉素敏感的葡萄球菌未检出体外诱导型克林霉素耐药。肠球菌对高浓度耐药率80.0%(1/5),未发现对万古霉素耐药或中介的肠球菌,对奎奴普丁/达福普汀耐药率为80.0%(1/5)。4株肺炎双球菌中检出1株对青霉素耐药(PRSP),未发现对头孢曲松、头孢吡肟、万古霉素耐药。②革兰阴性菌对各种抗生素的耐药性:阴沟肠杆菌、鲍氏不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌未检出对亚胺硫霉素耐药,对头孢三代、四代、阿米卡星耐药率均大于70%。其中1株铜绿假单胞菌对亚胺硫霉素中介耐药。
讨 论
近年来,院内感染受到临床医生普遍的重视。中枢神经系统感染病原菌的构成及耐药率分析对临床医生的诊断、用药、疗效判定有着重要的作用[2]。
中枢神经系统脑脊液的细菌学检查对于细菌性脑膜炎的病原学诊断很有价值,同时有助于浆液性脑膜炎或无菌性脑膜炎的鉴别诊断。病原菌性脑膜炎对人类危害较大,位居世界感染性疾病死亡率的前10位[3]。对此,经验性用药可选择万古霉素联合碳青霉烯类(如美罗培南)[4]中的一种,美罗培南比亚胺硫霉素易穿透血脑屏障。
革兰阴性菌以阴沟肠杆菌、鲍氏不动杆菌为主,对头孢吡肟、头孢他啶、阿米开星耐药率大于65%。特别是鲍氏不动杆菌在物表、皮肤易生存,易与手术操作等引发的医院感染有关。国外近年来关于多药耐药不动杆菌属所致术后中枢神经系统感染报道较多[5]。
本研究未检出脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌,原因可能与标本致病菌含量过少、采样前抗生素的使用、感染菌培养条件苛刻、未及时送检等有关。墨汁负染色是隐球菌性脑膜炎诊断最简便而迅速的方法,阳性率约70%。虽然培养是确诊的“金标准”,但阳性率不高,故培养阴性者也不能除外诊断。
参考文献
1 张卓然,倪语星.临床微生物学和微生物检验.北京:人民卫生出版社,2006: 460-464.
2 李光辉,朱德妹,张婴元,等.1995-2004 年上海地区部分医院脑脊液分离菌的分布及耐药性.中华医院感染学杂志,2007,17(10):1278-1281.
3 周建新,王强,唐明忠,等.神经外科患者脑脊液细菌流行病学和耐药性监测.中华医院感染学杂志,2006,16(2):1542-1547.
4 贺斌,赵忠新,等.急性细菌性脑膜炎和病毒性脑膜炎的鉴别诊断.临床神经病学杂志,2002,15(1):29.
5 刘军,刘丽丹,刘超.颅脑术后脑脊液切口漏致颅内感染的临床处理.中华医院感染学杂志,2006,16(2):158.
关键词 脑脊液 病原菌 耐药性
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.15.165
资料与方法
2007年3月～2009年11月送检的脑脊液样本685份,男452例,女233例;年龄2个月～13岁。
病原菌分离、鉴定:以无菌技术采集脑脊液2～3ml立即送检,脑脊液2000转/分离心20分钟,取沉淀物涂片,做革兰染色、墨汁负染色,镜检。根据染色反应及细菌形态特征,可初步提示感染细菌的种类,并报告于临床。用接种环挑取经离心后的沉淀物,分别接种于血琼脂平板、麦康凯琼脂平板及巧克力琼脂平板上,置35℃环境中培养18～24小时,第2天检视,若有细菌生长,分离培养鉴定,弃去脑心浸液肉汤管;若有1～3个凝固酶阴性葡萄球菌生长,脑心浸液肉汤管不混浊,则无需鉴定、药敏试验。离心后的沉淀物接种于装有10ml脑心浸液肉汤管,置35℃环境中培养72小时,每天检视有无细菌生长。若有菌生长,分离培养鉴定。
仪器和试剂:采用黑马DL-96细菌鉴定仪进行鉴定、药敏试验。
方法:按照《临床检验操作规程》第2版的要求分离致病菌[1],用黑马DL-96进行鉴定和药敏。大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC 25923及铜绿假单胞菌ATCC 27853为质控菌株。
ESBLs、MRS、D Test的检测:采用CLSI 2004年推荐的纸片扩散法。用头孢西丁代替笨唑西林。对红霉素耐药而克林霉素敏感的菌株邻近红霉素一边的克林霉素抑菌环出现截平现象(大写D样),为D-试验阳性,即体外诱导型克林霉素耐药。
结 果
病原菌检出率,见表1。
分离菌的耐药分析:①革兰阳性菌对各种抗生素的耐药性:分离出葡萄球菌属72株,其中CNS最多,表皮葡萄球菌47株,其他凝固酶阴性葡萄球菌12株,金黄色葡萄球菌13株,MRSA、MRSCNS的检出率分别为76.9%(10/13)、72.9%(43/59)。未发现对万古霉素耐药或中介的葡萄球菌,对奎奴普丁/达福普汀耐药率为6.6%。5株红霉素敏感的葡萄球菌未检出体外诱导型克林霉素耐药。肠球菌对高浓度耐药率80.0%(1/5),未发现对万古霉素耐药或中介的肠球菌,对奎奴普丁/达福普汀耐药率为80.0%(1/5)。4株肺炎双球菌中检出1株对青霉素耐药(PRSP),未发现对头孢曲松、头孢吡肟、万古霉素耐药。②革兰阴性菌对各种抗生素的耐药性:阴沟肠杆菌、鲍氏不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌未检出对亚胺硫霉素耐药,对头孢三代、四代、阿米卡星耐药率均大于70%。其中1株铜绿假单胞菌对亚胺硫霉素中介耐药。
讨 论
近年来,院内感染受到临床医生普遍的重视。中枢神经系统感染病原菌的构成及耐药率分析对临床医生的诊断、用药、疗效判定有着重要的作用[2]。
中枢神经系统脑脊液的细菌学检查对于细菌性脑膜炎的病原学诊断很有价值,同时有助于浆液性脑膜炎或无菌性脑膜炎的鉴别诊断。病原菌性脑膜炎对人类危害较大,位居世界感染性疾病死亡率的前10位[3]。对此,经验性用药可选择万古霉素联合碳青霉烯类(如美罗培南)[4]中的一种,美罗培南比亚胺硫霉素易穿透血脑屏障。
革兰阴性菌以阴沟肠杆菌、鲍氏不动杆菌为主,对头孢吡肟、头孢他啶、阿米开星耐药率大于65%。特别是鲍氏不动杆菌在物表、皮肤易生存,易与手术操作等引发的医院感染有关。国外近年来关于多药耐药不动杆菌属所致术后中枢神经系统感染报道较多[5]。
本研究未检出脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌,原因可能与标本致病菌含量过少、采样前抗生素的使用、感染菌培养条件苛刻、未及时送检等有关。墨汁负染色是隐球菌性脑膜炎诊断最简便而迅速的方法,阳性率约70%。虽然培养是确诊的“金标准”,但阳性率不高,故培养阴性者也不能除外诊断。
参考文献
1 张卓然,倪语星.临床微生物学和微生物检验.北京:人民卫生出版社,2006: 460-464.
2 李光辉,朱德妹,张婴元,等.1995-2004 年上海地区部分医院脑脊液分离菌的分布及耐药性.中华医院感染学杂志,2007,17(10):1278-1281.
3 周建新,王强,唐明忠,等.神经外科患者脑脊液细菌流行病学和耐药性监测.中华医院感染学杂志,2006,16(2):1542-1547.
4 贺斌,赵忠新,等.急性细菌性脑膜炎和病毒性脑膜炎的鉴别诊断.临床神经病学杂志,2002,15(1):29.
5 刘军,刘丽丹,刘超.颅脑术后脑脊液切口漏致颅内感染的临床处理.中华医院感染学杂志,2006,16(2):158.