【摘 要】
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目的应用锁核酸探针技术检测肿瘤样本中K-ras基因突变,探讨其诊断价值。方法结合锁核酸TaqMan探针与实时荧光PCR技术建立K-ras基因突变快速检测法,与传统聚合酶链反应-单链构
【机 构】
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湖南省湘潭县人民医院检验科,湖南省临床检验中心分子生物学实验室
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目的应用锁核酸探针技术检测肿瘤样本中K-ras基因突变,探讨其诊断价值。方法结合锁核酸TaqMan探针与实时荧光PCR技术建立K-ras基因突变快速检测法,与传统聚合酶链反应-单链构象多态性分析法(PCR-SSCP)及测序结果进行比较,评价新方法的诊断价值。结果锁核酸探针PCR法可对肿瘤样本中K-ras基因突变进行有效检测,操作简便;可在104倍的野生型K-ras基因背景下检测出突变,灵敏度为0.1%,可检测突变基因最低限为10拷贝/mL,相对应传统方法 ,本方法可同时进行较大规模的样品检测,更快捷和灵敏。结论锁核酸探针实时荧光PCR法较PCR-SSCP法有明显优势,适用于大规模临床样本的K-ras基因突变检测,可作为肿瘤筛查和预后判断有效手段。
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