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摘要:根据相关检测发现,黄曲霉素是一种具有很强毒性的物质,一般在粮食、食用油中存在,具有引发癌症的特性。因此,在生产过程中,必须对粮油食品中黄曲霉素的检测给以高度重视,以保证人们日常生活的食用安全,避免癌症患者不断增多。本文就粮油食品中黄曲霉素的几种常用检测方法进行阐述和对比,以为提高粮油食品中黄曲霉素检测结果准确性提供可参考依据。
关键词:粮油食品;黄曲霉素;检测方法
目前,粮油食品中黄曲霉素的检测方法主要包括高效液相色谱法、酶联免疫法、免疫胶体金检测法和免疫亲和柱和荧光光度法等四种,根据实际情况选择最合适的检测方法,可以大大提高检测结果的准确性,从而提高粮油食品食用的安全性。
一、高效液相色谱法分析
在相关资料中,高效液相色谱法也被叫做是“高速液相色谱”、“高压液相色谱”、“近代柱色谱”和“高分离度液相色谱”等,一般采用液体的方式进行检测。在高压系统中安装有不同极性的单一或者混合的容积所对应的色谱柱,在液体被输入系统后,各种成分会被分离开,从而在各种检测器中进行相应的检测,以对试样进行全面分析。
在实践过程中采用高效液相色谱法,可以快速、定性的进行黄曲霉素的检测,并且检测下限较低,大大提高检测结果的准确性。一般情况下,20分钟可以完成黄曲霉素的检测,并将相关的毒素分离出来,检测下限可以达到每千克0.5μg,与国家提出的粮食、油等食品中黄曲霉素的含量相比,浓度低很多。但是,高效液相色谱法使用的相关设备仪器成本较高,对样品的要求也比较高,事先处理的相关操作比较繁琐,如果采用免疫亲和小柱进行处理,则会大大提高检测成本。因此,采用高效液相色谱法进行黄曲霉素的检测,在基层部门中无法进行推广,只适用于国家或省级的相关检测机构中。
二、酶联免疫法分析
一般情况下,酶联免疫法也被叫做是酶联免疫吸附法,通过将可溶性抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固态物质上的方式,对免疫反应进行定性和定量检测,以保证检测结果的可靠性。根据酶、免疫和生化计数的相关知识,对黄曲霉素的检测进行全面分析,并灵活运用固态酶联免疫吸附的相关原理,在聚苯乙烯微量反应板的空穴中放入AFTB1特异性抗体,同时将样品提取液(未知抗原)和酶标 AFTB1 抗原(已知抗原)放入其中,让他们与抗体进行强烈的免疫竞争方反应。待上述操作完成后,加入酶底物进行显色,并根据颜色的深浅情况,对抗体和酶标AFTB1抗原结合的量进行判断,如果样品中的AFTB1较多,那么被抗原结合的酶标AFTB1抗原则很少,即呈现浅色状态;如果样品中的AFTB1较少,那么被抗原结合的酶标AFTB1抗原则很多,即呈现深色状态。
在实际检测过程中,使用酶联免疫法进行黄曲霉素的检测,具有毒性小、检测速度较快等特点,但试剂的使用寿命较短,并且重复性不强,必须在温度较低的情况下才能进行保存。因此,酶联免疫法检测结果中,假阳性概率比较高,为了保证检测结果的真实性和可靠性,必须配置专门的酶标仪。与此同时,酶联免疫法在进行基层检测时,具有较高的暗度,对样品提出了较高要求,因此,在进行脂肪量和含盐量较高的样品时,要事先进行相关处理后才能按照上述流程进行检测。在实践过程中,酶联免疫法一般可以先进行初筛,在阴性状态下则可去除,在阳性状态下则可继续下一步检测。
三、免疫胶体金检测法分析
在相关检测中,免疫胶体金检测法也被叫做金标免疫层析法,通过在抗原以内将胶体金看作是示踪标志的方式,可以了解黄曲霉素的分布情况,从而对样品中黄曲霉素的检测结果进行全面分析。一般胶体金是还原剂的作用下,氯金酸通过聚合的方式形成的具有一定大小的金颗粒,同时在静电作用下,这种金颗粒可以保持比较稳定的胶体状态,从而称作是胶体金。在检测过程中,碱性情况下胶体金会带负电荷,从而与蛋白质分子中的正电荷基团会紧密结合在一起。与此同时,作为特定的免疫反应标记物,可以将反应物的定位和分布情况在电镜下清晰显示出来,以便于进行有效分析。例如:通过还原法使用柠檬酸三钠进行胶体金颗粒的制作,并将抗黄曲霉素其中一个素标记出来,同时在玻璃纤维上喷洒其单克隆抗体,这种素的偶联抗原和二抗鼠抗驴会分别在硝酸纤维膜上结合。最后通过切割的方式,将样本垫、胶金垫、硝酸纤维膜、吸水纸组装切成胶体金试纸,并放入到检测卡中进行检测。
在实践过程中,这种检测方法所需要的时间比较短,操作比较简单、方便和快捷,可用于单份样品的检测,具有非常高的检测效率,从而在现场快速检测中应用较多。但是,通常是通过半定量的方式进行检测,作为一种快速筛查的方法。
四、免疫亲和柱和荧光光度法分析
由于免疫亲和柱具有较强的免疫反应活性、荧光光度计具有较高的检测灵敏度,因此,将两者结合在一起,可以形成一种新的监测技术,成为了检测粮油食品中黄曲霉素的一种国标方法。在实际操作过程中,通过采用经过滤、水稀释和用含有黄曲霉素其中一种的抗体的免疫亲和柱进行净化后的甲醇与水的溶液进行提取,其中,甲醇和水的比例为七比三,在经过甲醇的洗涤和脱水后,在添加
溴溶液进行行衍生,可以有效提高检测灵敏度,从而提高检测结果的准确性。
采用这种方法进行黄曲霉素的检测,与色谱法相比,准确性更高,操作更简单、方便和快捷,并且不会出现安全事故,在不需要进行毒素标样、毒气柜和不与黄霉曲素直接接触的情况下,有机试剂的用量也比较少,从而节省检测时间。但是,这种方法只适合于检测黄曲霉素的总量,不能用于单独检测中,对水和试剂都有较高的要求,必须在高纯水和重蒸水情况下,才能保证检测结果的可靠性。
结束语:
综上所述,在实践过程中,粮油食品中黄曲霉素的检测,需要根据不同级别、不同机构性质来选择合适的检测方法,才能满足上述各种方法的检测特点,从而保证检测结果的可靠性,使检测销量和检测率得到不断提高,最终提高检测结果的准确性,确保食品食用过程的安全。
参考文献:
[1]杨骏青,梁海燕,赵鸣,陈家铃,王家传,侯京朋,秦春莉,王轶博.食品中黄曲霉毒素的电化学检测及应用前景[J].广州化工,2014,22:1-2+18.
[2]朱云,徐琳娜,艾兰红,高义标.粮油产品中黄曲霉毒素检测方法研究[J].粮食科技与经济,2014,05:41-43.
[3]李永波,陈艳,何丰瑞,秦国富,李红光,左蓓.免疫亲和柱净化-柱前衍生-HPLC荧光法测定粮油食品中的黄曲霉毒素[J].中国卫生检验杂志,2014,17:2477-2480.
[4]李芳,黎琳琳,劉绪斌,沙力,李艳美,储晓刚,粟有志,雷红琴.无需衍生化样品处理快速测定食品中黄曲霉毒素B_1[J].食品安全质量检测学报,2014,09:2859-2863.
[5]郑会超,周育,黄新,吉小凤,吴建良,蒋永清.青粗饲料中多种黄曲霉毒素高效液相色谱检测方法[J].浙江农业学报,2014,05:1186-1190.
关键词:粮油食品;黄曲霉素;检测方法
目前,粮油食品中黄曲霉素的检测方法主要包括高效液相色谱法、酶联免疫法、免疫胶体金检测法和免疫亲和柱和荧光光度法等四种,根据实际情况选择最合适的检测方法,可以大大提高检测结果的准确性,从而提高粮油食品食用的安全性。
一、高效液相色谱法分析
在相关资料中,高效液相色谱法也被叫做是“高速液相色谱”、“高压液相色谱”、“近代柱色谱”和“高分离度液相色谱”等,一般采用液体的方式进行检测。在高压系统中安装有不同极性的单一或者混合的容积所对应的色谱柱,在液体被输入系统后,各种成分会被分离开,从而在各种检测器中进行相应的检测,以对试样进行全面分析。
在实践过程中采用高效液相色谱法,可以快速、定性的进行黄曲霉素的检测,并且检测下限较低,大大提高检测结果的准确性。一般情况下,20分钟可以完成黄曲霉素的检测,并将相关的毒素分离出来,检测下限可以达到每千克0.5μg,与国家提出的粮食、油等食品中黄曲霉素的含量相比,浓度低很多。但是,高效液相色谱法使用的相关设备仪器成本较高,对样品的要求也比较高,事先处理的相关操作比较繁琐,如果采用免疫亲和小柱进行处理,则会大大提高检测成本。因此,采用高效液相色谱法进行黄曲霉素的检测,在基层部门中无法进行推广,只适用于国家或省级的相关检测机构中。
二、酶联免疫法分析
一般情况下,酶联免疫法也被叫做是酶联免疫吸附法,通过将可溶性抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固态物质上的方式,对免疫反应进行定性和定量检测,以保证检测结果的可靠性。根据酶、免疫和生化计数的相关知识,对黄曲霉素的检测进行全面分析,并灵活运用固态酶联免疫吸附的相关原理,在聚苯乙烯微量反应板的空穴中放入AFTB1特异性抗体,同时将样品提取液(未知抗原)和酶标 AFTB1 抗原(已知抗原)放入其中,让他们与抗体进行强烈的免疫竞争方反应。待上述操作完成后,加入酶底物进行显色,并根据颜色的深浅情况,对抗体和酶标AFTB1抗原结合的量进行判断,如果样品中的AFTB1较多,那么被抗原结合的酶标AFTB1抗原则很少,即呈现浅色状态;如果样品中的AFTB1较少,那么被抗原结合的酶标AFTB1抗原则很多,即呈现深色状态。
在实际检测过程中,使用酶联免疫法进行黄曲霉素的检测,具有毒性小、检测速度较快等特点,但试剂的使用寿命较短,并且重复性不强,必须在温度较低的情况下才能进行保存。因此,酶联免疫法检测结果中,假阳性概率比较高,为了保证检测结果的真实性和可靠性,必须配置专门的酶标仪。与此同时,酶联免疫法在进行基层检测时,具有较高的暗度,对样品提出了较高要求,因此,在进行脂肪量和含盐量较高的样品时,要事先进行相关处理后才能按照上述流程进行检测。在实践过程中,酶联免疫法一般可以先进行初筛,在阴性状态下则可去除,在阳性状态下则可继续下一步检测。
三、免疫胶体金检测法分析
在相关检测中,免疫胶体金检测法也被叫做金标免疫层析法,通过在抗原以内将胶体金看作是示踪标志的方式,可以了解黄曲霉素的分布情况,从而对样品中黄曲霉素的检测结果进行全面分析。一般胶体金是还原剂的作用下,氯金酸通过聚合的方式形成的具有一定大小的金颗粒,同时在静电作用下,这种金颗粒可以保持比较稳定的胶体状态,从而称作是胶体金。在检测过程中,碱性情况下胶体金会带负电荷,从而与蛋白质分子中的正电荷基团会紧密结合在一起。与此同时,作为特定的免疫反应标记物,可以将反应物的定位和分布情况在电镜下清晰显示出来,以便于进行有效分析。例如:通过还原法使用柠檬酸三钠进行胶体金颗粒的制作,并将抗黄曲霉素其中一个素标记出来,同时在玻璃纤维上喷洒其单克隆抗体,这种素的偶联抗原和二抗鼠抗驴会分别在硝酸纤维膜上结合。最后通过切割的方式,将样本垫、胶金垫、硝酸纤维膜、吸水纸组装切成胶体金试纸,并放入到检测卡中进行检测。
在实践过程中,这种检测方法所需要的时间比较短,操作比较简单、方便和快捷,可用于单份样品的检测,具有非常高的检测效率,从而在现场快速检测中应用较多。但是,通常是通过半定量的方式进行检测,作为一种快速筛查的方法。
四、免疫亲和柱和荧光光度法分析
由于免疫亲和柱具有较强的免疫反应活性、荧光光度计具有较高的检测灵敏度,因此,将两者结合在一起,可以形成一种新的监测技术,成为了检测粮油食品中黄曲霉素的一种国标方法。在实际操作过程中,通过采用经过滤、水稀释和用含有黄曲霉素其中一种的抗体的免疫亲和柱进行净化后的甲醇与水的溶液进行提取,其中,甲醇和水的比例为七比三,在经过甲醇的洗涤和脱水后,在添加
溴溶液进行行衍生,可以有效提高检测灵敏度,从而提高检测结果的准确性。
采用这种方法进行黄曲霉素的检测,与色谱法相比,准确性更高,操作更简单、方便和快捷,并且不会出现安全事故,在不需要进行毒素标样、毒气柜和不与黄霉曲素直接接触的情况下,有机试剂的用量也比较少,从而节省检测时间。但是,这种方法只适合于检测黄曲霉素的总量,不能用于单独检测中,对水和试剂都有较高的要求,必须在高纯水和重蒸水情况下,才能保证检测结果的可靠性。
结束语:
综上所述,在实践过程中,粮油食品中黄曲霉素的检测,需要根据不同级别、不同机构性质来选择合适的检测方法,才能满足上述各种方法的检测特点,从而保证检测结果的可靠性,使检测销量和检测率得到不断提高,最终提高检测结果的准确性,确保食品食用过程的安全。
参考文献:
[1]杨骏青,梁海燕,赵鸣,陈家铃,王家传,侯京朋,秦春莉,王轶博.食品中黄曲霉毒素的电化学检测及应用前景[J].广州化工,2014,22:1-2+18.
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[3]李永波,陈艳,何丰瑞,秦国富,李红光,左蓓.免疫亲和柱净化-柱前衍生-HPLC荧光法测定粮油食品中的黄曲霉毒素[J].中国卫生检验杂志,2014,17:2477-2480.
[4]李芳,黎琳琳,劉绪斌,沙力,李艳美,储晓刚,粟有志,雷红琴.无需衍生化样品处理快速测定食品中黄曲霉毒素B_1[J].食品安全质量检测学报,2014,09:2859-2863.
[5]郑会超,周育,黄新,吉小凤,吴建良,蒋永清.青粗饲料中多种黄曲霉毒素高效液相色谱检测方法[J].浙江农业学报,2014,05:1186-1190.