一种基于CRISPR技术的肺癌细胞基因标记方法

来源 :徐州医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：yeah88

【摘要】

：

目的建立基于成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)技术的功能基因标签标记方法。方法通过分子无缝克隆技术构建Cas9核酸酶表达载体、[STBX]DCAF12[STBZ]基因特异的sgRNA表达

【作者】

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黄缓缓应杰王振毅陈锦飞韦栋平

【机构】

：

南京医科大学附属南京医院,盱眙县人民医院临床科研中心,南京大学附属泰康仙林鼓楼医院

【出处】

：

徐州医科大学学报

【发表日期】

：

2020年5期

【关键词】

：

CRISPR基因组编辑表位标签基因标记融合表达 CRISPR genome editingepitope taggene tagging and fusi

【基金项目】

：

国家自然科学基金面上项目(81472793,81672895),南京市医学科技发展基金(QRX17018)

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目的建立基于成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)技术的功能基因标签标记方法。方法通过分子无缝克隆技术构建Cas9核酸酶表达载体、[STBX]DCAF12[STBZ]基因特异的sgRNA表达载体以及双剪切型供体DNA载体;将上述质粒共同转染肺癌细胞A549,用嘌呤霉素抗性基因作为选择标记进行筛选。联合RNA干扰和Western blot技术鉴定[STBX]DCAF12[STBZ]基因是否被HA标签正确标记;后续用Cre重组酶切除胞内选择标记,并通过PCR和Western blot技术确认;最后通过细胞

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