【摘 要】
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目的 克隆人CD271基因,并在大肠杆菌中表达.方法 采用RT-PCR技术从人REH细胞系中扩增CD271基因,将其克隆人pET22b表达载体,转化大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院天津血液学研究所,协和干细胞基因工程有限公司
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目的 克隆人CD271基因,并在大肠杆菌中表达.方法 采用RT-PCR技术从人REH细胞系中扩增CD271基因,将其克隆人pET22b表达载体,转化大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行纯化及Western blot鉴定.结果 重组表达质粒pET22b/CD271经双酶切鉴定,可见1 197 bp的目的 基因条带.表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约75 000处可见表达条带.IPTG浓度为0.5 mmol/L时,目的 蛋白表达量最高.纯化后蛋白纯度为82.5%.Western blot检测表明纯化后的蛋白具有良好的反应原性.结论已成功克隆了人CD271基因,并在大肠杆菌中获得表达.
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