大鼠穿透性角膜移植模型建立过程中的技术特征(英文)

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背景:大鼠角膜的主要组织相容性抗原的表达与人类角膜相似。早期实验证实大鼠作为穿透性角膜移植具有较好的重复性和可靠性,且移植手术难度比小鼠低。目的:建立大鼠穿透性角膜移植模型,分析模型制作中并发症出现的原因及相应对策,探讨提高大鼠角膜移植模型成功率的方法。设计:随机对照实验。单位:华中科技大学同济医学院协和医院眼科。材料:实验于2004-03/05在华中科技大学同济医学院协和医院眼科完成。选取远交系两月龄Wistar雌性大鼠76只,随机分为实验组和对照组,38只/组,无眼部疾病,清洁级,体质量180~200g,右眼作为受体;SD雌性大鼠38只,双眼作为供体。全部动物均由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。方法:采用中心穿透性原位角膜移植术,均选择Wistar大鼠右眼建立模型。术前10min用美多丽滴眼两次,将右眼瞳孔充分扩大,达到4.0mm。按体质量3.0mL/kg水合氯醛腹腔注射全麻,体积分数0.1地卡因滴眼液术前5min点眼两次。大鼠头部常规消毒,保持鼠眼处于水平位置,保持大鼠呼吸道通畅。用有齿眼科镊夹持大鼠术眼后部,固定术眼使其处于半脱位状态。以3.5mm直径环钻钻取SD大鼠双眼角膜作为植片,内皮面向上放入培养皿中,用质量浓度20g/L甲基纤维素覆盖备用。以3.0mm直径环钻钻取Wistar大鼠右眼角膜作为植孔,立即将植片用10-0尼龙线间断缝合于Wistar大鼠右眼植孔,实验组角膜移植缝合8针,对照组角膜移植缝合6针。术后滴氧氟沙星眼药水,胶带粘贴术眼。观察角膜排斥反应,以混浊、水肿及新生血管3项指标进行评分,3项评分之和为当日排斥反应指数。当日排斥反应指数≥5或角膜浑浊达到3级时,视为排斥反应发生。运用χ2和Fisher确切概率法进行统计学检验。主要观察指标:①两组大鼠角膜移植后并发症发生比较。②角膜植片存活时间及角膜排斥反应。结果:作为受体的76只Wistar大鼠中途脱落5只,其中实验组术后意外死亡1只,对照组术后意外死亡2只,互相撕咬伤及术眼角膜2只,淘汰后均及时补充,进入结果分析数量保持76只。①角膜移植后并发症发生比较:实验组虹膜前粘连且瞳孔不圆、伤口闭合欠佳且前房不形成数量明显低于对照组(4,14只,P=0.007;2,9只,P=0.047)。②角膜植片存活时间及角膜排斥反应:实验组和对照组角膜植片存活时间基本接近犤(8.9±2.3),(8.6±2.3)d,P>0.05犦;角膜移植术后16d,两组全部发生排斥反应,排斥反应发生率100%。结论:在保留缝线、不加干预的情况下,大鼠角膜移植与人类角膜移植急性排斥反应相似。实验结果说明,大鼠3.5mm植片对3.0mm植孔的角膜移植缝合8针,可以减低大鼠角膜移植的并发症,使其成为理想的角膜移植动物模型。熟练的显微操作技术,良好的手术器械,以及充分散大的瞳孔可以最大程度地减少大鼠术后并发症的发生。
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