【摘 要】
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[目的]制备抗LmGLP-1的高特异性多克隆抗体,为LmGLP-1的活性和应用研究提供基础.[方法]以高纯度LmGLP-1为免疫原,对SD大鼠进行皮下注射免疫,获得抗血清,通过Western Blotting
【机 构】
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广东药科大学医药化工学院,广东中山528458
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[目的]制备抗LmGLP-1的高特异性多克隆抗体,为LmGLP-1的活性和应用研究提供基础.[方法]以高纯度LmGLP-1为免疫原,对SD大鼠进行皮下注射免疫,获得抗血清,通过Western Blotting鉴定其特异性,采用ELISA测定多抗效价,建立间接ELISA测定LmGLP-1的工作曲线,并验证多抗在免疫沉淀(IP)和间接ELISA测定大鼠血样中LmGLP-1抗原的应用.[结果]获得的抗血清能特异性识别利用原核表达系统制备的LmGLP-1抗原,效价高达1∶16 000,建立的间接非竞争ELISA工作曲线在0.50～80 ng/mL范围内线性良好,检出限为0.25 ng/mL,能有效测定复杂血样中LmGLP-1的浓度.免疫沉淀反应显示,抗血清能识别大鼠体内的外源性LmGLP-1,也可识别低水平的内源性GLP-1.[结论]所制备的LmGLP-1抗血清具有良好的反应性和特异性,为后续LmGLP-1的机制研究和药效、药代动力学的开展提供了基础.
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