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采用Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄鼠睾丸组织脾内埋植免疫同系雌鼠，选择免疫应答最强的３只鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合。经有限稀释法克隆化培养后，应用间接ＥＬＩＳＡ法筛选出４株Ｈ－Ｙ抗体阳性细胞系（包被抗原为雄鼠的睾丸上清及脾细胞），经雌、雄性小鼠脾细胞预吸收后的ＥＬＩＳＡ结果表明：这些单抗具有雄性特异性。根据间接免疫荧光检测及Ｓｒｙ片段的ＰＣＲ扩增分析，其中一株单抗用于小鼠胚胎性别鉴定的准确率可达７５％。