目的研究云芝多糖对小鼠脾细胞的免疫增强作用。方法水提醇沉法制备云芝粗多糖,采用不同浓度的乙醇对所得云芝粗多糖进行梯度醇沉,并计算各级产物的总多糖含量及收率。将小鼠脾细胞分别与云芝粗多糖及分级醇沉各级样品共同孵育,采用CCK-8法检测各样品对脾细胞增殖、对Con A或LPS诱导的脾细胞增殖的影响,采用酶联免疫法检测各级产物对NO释放的影响。结果分级醇沉各级产物多糖含量差异较小,但收率差别较大,其中30%浓度醇沉多糖收率最高,40%浓度醇沉多糖收率最低。云芝多糖分级醇沉各级样本对小鼠脾细胞增殖均有一定的促进作用,综合评价,优选出70%、80%醇沉样本较好,且作用效果明显优于粗多糖。总多糖及70%、80%醇沉多糖样品分别在0.50~1.25、0.50~0.75、0.50~1.00 mg·m L-1内药理活性与剂量呈正相关,且对Con A或LPS诱导的脾细胞增殖及NO释放有明显的协同作用(P<0.05)。结论云芝粗多糖及分级醇沉各级产物对体外小鼠脾细胞具有免疫增强作用,本研究为云芝多糖的开发、利用研究提供了一定理论依据。