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【目的】研制新霉素（neomycin,NEO）免疫膜层析快速检测试纸。【方法】建立分泌抗新霉素单克隆抗体（NEO mAb）杂交瘤细胞株,用胶体金免疫膜层析试验（GICA）制备NEO残留快速检测试纸（NEO-Strip）,并对其性能进行鉴定。【结果】抗新霉素单克隆抗体的亲和力常数为3.75×1010 mol.L-1;制备的NEO-Strip目测限为50 ng.mL-1;试纸可特异性检测NEO,与庆大霉素、链霉素、妥布霉素、紫苏霉素、莱克多巴胺、沙丁胺醇、泰乐菌素和氯霉素等其它药物均无交叉反应性;就