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目的 探讨人自体角膜缘干细胞(LSCs)体外培养及鉴定的方法.方法 将供体新鲜人角膜缘组织在制备的含20%胎牛血清DMEM/F12培养基的羊膜载体上应用组织块培养法进行体外培养,对培养获得的LSCs用苏木精-伊红染色在倒置显微镜下进行形态学观察,用免疫荧光技术鉴定培养的LSCs细胞.结果 组织块静置2h后贴壁良好,3～4d细胞从组织块边缘萌出,7～10d细胞出现生长高峰,12～14d形成良好的细胞单层.细胞形态呈多边形、圆形、卵圆形和梭形.第14天时行间接免疫荧光染色,可见大量细胞表达p63,呈细胞质的绿色荧光;少量细胞表达AE5,呈细胞质的绿色荧光和细胞核的红色荧光.结论 组织块培养法体外培养的人LSCs具有与正常人LSCs相一致的生物学特性。