【摘 要】
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为了快速获得结缕草(Zoysia japonica)SSR反应体系,采用5因素(模板DNA,Mg2+,dNTP, Taq酶和引物)4水平正交设计筛选合适的结缕草SSR体系,并通过随机挑选3对Tm相近的引物对该优
【机 构】
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中国农业大学草地研究所,Institute of Grassland Science
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为了快速获得结缕草(Zoysia japonica)SSR反应体系,采用5因素(模板DNA,Mg2+,dNTP, Taq酶和引物)4水平正交设计筛选合适的结缕草SSR体系,并通过随机挑选3对Tm相近的引物对该优化体系进行验证.结果表明:正交设计可应用于SSR-PCR反应体系的优化,20 μl最佳PCR反应体系中包括2 μl 10×buffer、1.0U Taq酶、0.2 mM 引物、100 ng模板DNA、0.2 mM dNTP、2.0 mM Mg+;对结缕草进行梯度退火实验,其最佳退火温度为56～58℃;可行扩增程序是:94℃预变性4 min、进行35个循环的94℃变性30 s、56～58℃退火40 s,72℃延伸1 min;72℃延伸10 min,4℃保存;该最适反应体系的建立,为今后结缕草SSR分析奠定了坚实基础.
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