【摘 要】
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目的：用T-A克隆法构建含BCR/ABL融合基因的重组质粒,并用实时定量PCR（RQ-PCR）方法制备标准品。方法：通过培养细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA后做PCR,电泳胶回收纯化,T-A克隆与pUCm
【机 构】
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浙江省海盐县人民医院,温州医学院附二院血液室
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目的：用T-A克隆法构建含BCR/ABL融合基因的重组质粒,并用实时定量PCR（RQ-PCR）方法制备标准品。方法：通过培养细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA后做PCR,电泳胶回收纯化,T-A克隆与pUCm-T载体连接,转染DH5a菌,蓝白斑筛选阳性菌落后,大量提取质粒,再进行RQ-PCR,最后制得BCR/ABL的重组质粒标准品。结果：蓝白斑筛选实验、PCR扩增均证实BCR/ABL融合基因重组到pUCm-T载体上,经RQ-PCR定量后得到BCR/ABL重组质粒标准品的标准曲线。结论：该方法能大量制备质粒
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