【摘 要】
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为探讨水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)四川省会东县分离物p3基因的遗传变异并获得其蛋白抗体,采用斑点酶联免疫吸附测定(dot enzyme-linked immunosorbent assay,Dot-E
【机 构】
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西南大学植物保护学院植物病害生物学重庆市高校级重点实验室; 四川省凉山彝族自治州会东县农牧局;
【基金项目】
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国家自然科学基金(31601607);重庆市基础科学与前沿技术研究专项(cstc2017jcyjAX0129);西南大学基本科研业务费(XDJK2015C168)
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为探讨水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)四川省会东县分离物p3基因的遗传变异并获得其蛋白抗体,采用斑点酶联免疫吸附测定(dot enzyme-linked immunosorbent assay,Dot-ELISA)检测四川省会东县水稻植株;利用反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)技术克隆了RSV p3基因,并利用MEGA 5.0软件构建其发育进化树;通过原核表达方法获得纯化蛋白,免疫家兔获得其多克隆抗体,并用Western blot方法检测其效价。结果显示,从四川省会东县水稻种植区共采集13份水稻植株病样,经Dot-ELISA检测有3份样品呈阳性;通过RT-PCR技术从阳性样品中扩增获得RSV四川省会东县分离物Huid04(GenBank登录号KX611339)p3基因全长,长度为636 nt;系统进化分析显示该分离物与KunM08(GenBank登录号为JQ927423)和DaL08(GenBank登录号为JQ927420)2个云南分离物的核苷酸相似性最高,分别为96.86%和97.01%;将重组质粒pET-32a/p3转化至大肠杆菌Escherichia coli表达菌株BL21pLysS,经异丙基硫代-β-半乳糖苷诱导后,获得了分子量为40 kD的融合p3蛋白;并将纯化蛋白免疫家兔后获取抗血清,经ELISA及Western blot检测验证其为RSV p3蛋白的多克隆抗体,且效价为1∶2 000。以转RSV p3基因本氏烟为材料,利用Western blot技术证明了该抗体可用于检测RSV p3蛋白。
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