【摘 要】
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目的:肺炎链球菌溶菌酶(N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase,LytA)作为肺炎链球菌多价核酸疫苗候选抗原的保护效能评价。方法:PCR技术从肺炎链球菌R6标准株扩增LytA基因序列
【机 构】
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第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所
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目的:肺炎链球菌溶菌酶(N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase,LytA)作为肺炎链球菌多价核酸疫苗候选抗原的保护效能评价。方法:PCR技术从肺炎链球菌R6标准株扩增LytA基因序列,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-LytA,免疫印迹(western-blot)检测重组质粒在哺乳动物BHK-21细胞中的表达。与前期构建的肺炎链球菌表面蛋白A(Pneumococcal surface protein A,PspA)N端序列基因构建的质粒pcDNA3.1-PspA’核酸疫苗联合或单独肌肉注射免疫BABL/c小鼠,检测各组小鼠血清特异性抗体IgG水平,并观察免疫小鼠肺炎链球菌D39腹腔攻击21d生存情况。结果:ELISA检测发现3组(pcDNA3.1-LytA组,pcDNA3.1-PspA’组,pcDNA3.1-LytA+pcDNA3.1-PspA’组)实验组小鼠特异性IgG水平较空质粒对照组显著升高(P<0.001),pcDNA3.1-LytA+pcDNA3.1-PspA’组小鼠抗LytA特异性抗体IgG水平较pcDNA3.1-LytA组明显升高(P<0.01),但是与pcDNA3.1-PspA’组比较抗PspA特异性抗体IgG水平无显著差异(P>0.05)。小鼠攻击试验提示pcDNA3.1-LytA+pcDNA3.1-PspA’组小鼠中位生存时间较pcDNA3.1-LytA组及空质粒对照组显著延长(P<0.01),但与pcDNA3.1-PspA’组比较中位生存时间无显著差异(P>0.05),生存曲线相似。结论:LytA联合PspA’的肺炎链球菌多价核酸疫苗免疫效能并不优于单一抗原PspA’的肺炎链球菌核酸疫苗,LytA作为肺炎链球菌多价核酸疫苗的优势候选抗原组分之一有待进一步研究。
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