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[摘要]要建立药用的中间体7-ACA细菌内毒素检查方法。本文是按照2010年的中国药典中的附录进行的本次试验分析,根据分析判定相应的结果。研究结果表明了供试品溶液的浓度,如果浓度是1.25mg/ml的时候,就说明对细菌内毒素的检查是没有任何的干扰的,使用药用中间体7-ACA的检查方法是可行的。
[关键词]7-ACA;细菌内毒素;检查方法
药用中间体7-ACA是一种头孢类的抗生素前身,这种头孢类的抗生素是合成的,没有将细菌内的毒素进行有效的去除。内毒素就是一种威胁着人体生命安全的一种致病的因子,只要很少的内毒素就会引起生物或者是病理作用,因此现在7-ACA细菌内毒素的检查并且进行有效的控制,已经成为了研究的重点。本文的研究中,考虑到7-ACA的PH比较低,仅仅在3.0-5.0之间,但是细菌内毒素比较适合的PH值是在6.0-8.0之间,因此就需要进行供试品的调节,需要调节到6.0-8.0之间,之后才能够开始进行检测。
一、材料
药用中间体7-ACA,这一药品的批号分别是691312017、691312018和691312019。
鲎试剂1,这一试剂是TAL1,批号是1302130,是由湛江博康海洋生物有限责任公司制造的。
鲎试剂2,TAL2,湛江安度斯生物有限公司。
细菌内毒素工作标准品(CSE,中国食品药品生物检定院,批号为150601-201176,规格为100EU/支)。
细菌内毒素检测用水和碳酸钠。
二、方法和结果
(一)鲎试剂的灵敏度复核
在本次试验中使用的是2010年版本的中国药典中的第二部的附录进行的7-ACA细菌内毒素检查方法的研究,在试验的过程中,要求灵敏度要在0.5-2.0λ之间,具体的试验结果如表1所示:
(二)供试品中细菌内毒素限制的确定
在本次产品中使用的是药用中间体,从成品的注射剂上来说,使用的是通用量,通用量是在1h内输入的药量不能够超过1.2g,在计算的过程中使用的是通用的量,也就是说M=1.2g/(60kg·h)=20mg,(kg·h)。使用的计算公式也是有着具体的要求的,具体的计算公式是L=K/M,在本次试验中,具体的计算公式是:L=K/M=5EU/(kg·h)/20mg/(kg·h)=0.25EU/mg。
(三)供试品有效的稀释浓度
在本次试验中,使用的是鲎试剂,这一试剂的灵敏度是0.125EU/ml,最大的有效的稀释倍数是(MVD)=1,这时的c就是λ/L=(0.125EU/mL)/(0.25EU/mg)=0.5mg/mL。
(四)供试品干扰预实验
称取药用中间体7-ACA(批号为1312017)约100mg,用1%的无热原碳酸钠溶液溶解,制成40mg/mL的溶液,再加细菌内毒素检查用水按表2浓度稀释成供试品管(NPC)和含有2)L浓度细菌内毒素的供试品阳性对照管(PPC)。
取2个不同厂家的鲎试剂,分别置上述NPC和PPC中进行反应,每个浓度分别平行做2支,另分别做阴性对照管(NC)和阳性对照管(PC)各2支,于37±I~C保温(60±2)min。则7-ACA干扰预实验结果见表2。
由表2可见,药用中间体在浓度>1.25mg/mL时对2个厂家鲎试剂会产生干扰作用;浓度≤1.25mg/mL时对2个厂家鲎试剂均无干扰作用。
(五)供试品干扰试验
根据预实验,将浓度为1.25mg/mL的供试品溶液进行干扰实验,实验结果见表3。
由表3可见,3批供试品浓度为1.25mg/mL时,Et均在0.5-2Es范围内,可认为在此浓度下供试品对鲎试剂无干扰作用。
(六)样品检测
取3批7-ACA样品稀释至0.5mg/mL(即最低有效浓度),以灵敏度0.125EU/mL的TAL进行检测,菌符合规定。
三、讨论
7-ACA细菌内毒素的检查的方法是非常重要的,因为只有将细菌内毒素的检查方法了解透彻,才能够根据具体的方法,对细菌内毒素进行有效的控制,否则这种毒素就会危及到人体的安全,对人们的生命产生严重的威胁。要想将7-ACA细菌内毒素的研制方法科学的研究出来,就要对7-ACA有着了解。7-ACA就是7一氨基头孢烷酸,这是一种比较常见的头孢母核,在7-ACA里有两个活性的基团,在活性基团上需要连接不同的侧链,在这样的情况下,就构成了头孢类的抗生素,这种头孢类的抗生素在性质上也有着一定的差异,例如头孢呋辛、头孢三嗪等。
头孢菌素类的抗身素在使用的过程中是极为重要的,在发展速度上也比较惊人,已经被很多的医学研究者所重视,现在临床上经常使用的,头孢菌素有很多中,大约达到了50种以上,在临床中京杭使用的也达到了30种以上,因此我们一定要重视7-ACA的研究,尤其是7-ACA細菌内毒素的检查的方法。在本次试验中使用的7-ACA就是由头孢菌素c裂解形成的,首先头孢菌通过发酵获得头孢菌素c。在裂解的过程中,使用的是酶法和化学法来获得粗品的研究,使用化学反应进行头孢菌素c锌盐的生产,在比较极端的环境下需要进行降温处理,使用的化学药品也是有毒有害的化学药品,经过这样的环节处理之后,人体使用之后就会带来很大的危害,需要得到我们的重视。使用酶法进行裂解是不会涉及到重金属的,在裂解的过程中,获得的粗品质量也比较好,污染小,裂解设备占地面积也比较小,因此在使用的过程中,一定要引起我们的注意。否则产生较大的环境污染,这样与国家对药品行业的要求是违背的。
7-ACA,中文名称7-氨基头孢烷,化学名称为3-乙酰氧甲基5-硫-7-氨基-8-氧-1-氮杂二环辛-2-烯一2羧酸。是玉米浆通过头孢菌发酵得到的头孢菌素c,头孢菌素c在酰胺键处水解得到7-AcA,它是生产头v,头孢哌酮等半合抗类产品的重要中间体。7-ACA是头孢菌素关键性中间体,已成为当今国际抗生素市场的主角,按销售额计,以头孢菌素和青霉素为主的B-内酰胺类抗生素发展最快,约占世界抗生素市场的70%。7-ACA是通过头孢菌素c裂解而成。豆油是在生产7-ACA过程中的一步,通过吸收豆油中的营养有益成分,可以养大细菌,再通过酶法生产出7-ACA中间体。
国内厂家采用化学法生产的主要原因是:国内不具有酶的生产能力,只能依靠进口酶,它的价格较高,使得酶法生产7-ACA成本与化学法相当,而在色泽外观上略逊于化学法,因此国内采用酶法技术的很少。从目前的国内主要生产厂家来看,化学法对环境污染严重以及职工劳动保护问题没有有效的治理措施,其经济效益在很大程度上是以牺牲环境和健康为代价获取的。
试验结果表明,药用中间体7-ACA用1%的碳酸钠调节pH后,稀释到适宜的浓度进行细菌内毒素检测对鲎试剂无干扰作用,可检测限值为0.1EU/mg及以上,可以保证细菌内毒素被有效检出。
[关键词]7-ACA;细菌内毒素;检查方法
药用中间体7-ACA是一种头孢类的抗生素前身,这种头孢类的抗生素是合成的,没有将细菌内的毒素进行有效的去除。内毒素就是一种威胁着人体生命安全的一种致病的因子,只要很少的内毒素就会引起生物或者是病理作用,因此现在7-ACA细菌内毒素的检查并且进行有效的控制,已经成为了研究的重点。本文的研究中,考虑到7-ACA的PH比较低,仅仅在3.0-5.0之间,但是细菌内毒素比较适合的PH值是在6.0-8.0之间,因此就需要进行供试品的调节,需要调节到6.0-8.0之间,之后才能够开始进行检测。
一、材料
药用中间体7-ACA,这一药品的批号分别是691312017、691312018和691312019。
鲎试剂1,这一试剂是TAL1,批号是1302130,是由湛江博康海洋生物有限责任公司制造的。
鲎试剂2,TAL2,湛江安度斯生物有限公司。
细菌内毒素工作标准品(CSE,中国食品药品生物检定院,批号为150601-201176,规格为100EU/支)。
细菌内毒素检测用水和碳酸钠。
二、方法和结果
(一)鲎试剂的灵敏度复核
在本次试验中使用的是2010年版本的中国药典中的第二部的附录进行的7-ACA细菌内毒素检查方法的研究,在试验的过程中,要求灵敏度要在0.5-2.0λ之间,具体的试验结果如表1所示:
(二)供试品中细菌内毒素限制的确定
在本次产品中使用的是药用中间体,从成品的注射剂上来说,使用的是通用量,通用量是在1h内输入的药量不能够超过1.2g,在计算的过程中使用的是通用的量,也就是说M=1.2g/(60kg·h)=20mg,(kg·h)。使用的计算公式也是有着具体的要求的,具体的计算公式是L=K/M,在本次试验中,具体的计算公式是:L=K/M=5EU/(kg·h)/20mg/(kg·h)=0.25EU/mg。
(三)供试品有效的稀释浓度
在本次试验中,使用的是鲎试剂,这一试剂的灵敏度是0.125EU/ml,最大的有效的稀释倍数是(MVD)=1,这时的c就是λ/L=(0.125EU/mL)/(0.25EU/mg)=0.5mg/mL。
(四)供试品干扰预实验
称取药用中间体7-ACA(批号为1312017)约100mg,用1%的无热原碳酸钠溶液溶解,制成40mg/mL的溶液,再加细菌内毒素检查用水按表2浓度稀释成供试品管(NPC)和含有2)L浓度细菌内毒素的供试品阳性对照管(PPC)。
取2个不同厂家的鲎试剂,分别置上述NPC和PPC中进行反应,每个浓度分别平行做2支,另分别做阴性对照管(NC)和阳性对照管(PC)各2支,于37±I~C保温(60±2)min。则7-ACA干扰预实验结果见表2。
由表2可见,药用中间体在浓度>1.25mg/mL时对2个厂家鲎试剂会产生干扰作用;浓度≤1.25mg/mL时对2个厂家鲎试剂均无干扰作用。
(五)供试品干扰试验
根据预实验,将浓度为1.25mg/mL的供试品溶液进行干扰实验,实验结果见表3。
由表3可见,3批供试品浓度为1.25mg/mL时,Et均在0.5-2Es范围内,可认为在此浓度下供试品对鲎试剂无干扰作用。
(六)样品检测
取3批7-ACA样品稀释至0.5mg/mL(即最低有效浓度),以灵敏度0.125EU/mL的TAL进行检测,菌符合规定。
三、讨论
7-ACA细菌内毒素的检查的方法是非常重要的,因为只有将细菌内毒素的检查方法了解透彻,才能够根据具体的方法,对细菌内毒素进行有效的控制,否则这种毒素就会危及到人体的安全,对人们的生命产生严重的威胁。要想将7-ACA细菌内毒素的研制方法科学的研究出来,就要对7-ACA有着了解。7-ACA就是7一氨基头孢烷酸,这是一种比较常见的头孢母核,在7-ACA里有两个活性的基团,在活性基团上需要连接不同的侧链,在这样的情况下,就构成了头孢类的抗生素,这种头孢类的抗生素在性质上也有着一定的差异,例如头孢呋辛、头孢三嗪等。
头孢菌素类的抗身素在使用的过程中是极为重要的,在发展速度上也比较惊人,已经被很多的医学研究者所重视,现在临床上经常使用的,头孢菌素有很多中,大约达到了50种以上,在临床中京杭使用的也达到了30种以上,因此我们一定要重视7-ACA的研究,尤其是7-ACA細菌内毒素的检查的方法。在本次试验中使用的7-ACA就是由头孢菌素c裂解形成的,首先头孢菌通过发酵获得头孢菌素c。在裂解的过程中,使用的是酶法和化学法来获得粗品的研究,使用化学反应进行头孢菌素c锌盐的生产,在比较极端的环境下需要进行降温处理,使用的化学药品也是有毒有害的化学药品,经过这样的环节处理之后,人体使用之后就会带来很大的危害,需要得到我们的重视。使用酶法进行裂解是不会涉及到重金属的,在裂解的过程中,获得的粗品质量也比较好,污染小,裂解设备占地面积也比较小,因此在使用的过程中,一定要引起我们的注意。否则产生较大的环境污染,这样与国家对药品行业的要求是违背的。
7-ACA,中文名称7-氨基头孢烷,化学名称为3-乙酰氧甲基5-硫-7-氨基-8-氧-1-氮杂二环辛-2-烯一2羧酸。是玉米浆通过头孢菌发酵得到的头孢菌素c,头孢菌素c在酰胺键处水解得到7-AcA,它是生产头v,头孢哌酮等半合抗类产品的重要中间体。7-ACA是头孢菌素关键性中间体,已成为当今国际抗生素市场的主角,按销售额计,以头孢菌素和青霉素为主的B-内酰胺类抗生素发展最快,约占世界抗生素市场的70%。7-ACA是通过头孢菌素c裂解而成。豆油是在生产7-ACA过程中的一步,通过吸收豆油中的营养有益成分,可以养大细菌,再通过酶法生产出7-ACA中间体。
国内厂家采用化学法生产的主要原因是:国内不具有酶的生产能力,只能依靠进口酶,它的价格较高,使得酶法生产7-ACA成本与化学法相当,而在色泽外观上略逊于化学法,因此国内采用酶法技术的很少。从目前的国内主要生产厂家来看,化学法对环境污染严重以及职工劳动保护问题没有有效的治理措施,其经济效益在很大程度上是以牺牲环境和健康为代价获取的。
试验结果表明,药用中间体7-ACA用1%的碳酸钠调节pH后,稀释到适宜的浓度进行细菌内毒素检测对鲎试剂无干扰作用,可检测限值为0.1EU/mg及以上,可以保证细菌内毒素被有效检出。