论文部分内容阅读
目的
观察R-脊椎蛋白3(Rspo3)对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖的影响及其机制。
方法分离、悬浮培养孕14~15 d的CD1胎鼠大脑侧脑室下区(SVZ)NSCs并通过免疫荧光法鉴定。取第3代处于对数生长期的NSCs分为实验组和对照组，体积各为1 mL。实验组添加储存浓度为50 μg/mL的Rspo3蛋白0.8 μL(终浓度40 ng/mL)，对照组添加等体积的NSCs培养液。干预后6 h通过BrdU细胞渗入实验法检测2组NSCs增殖情况。干预后4 h和8 h采用Western blotting实验检测β-catenin蛋白的表达。
结果免疫荧光染色结果显示90%以上细胞呈巢蛋白和SOX2阳性。经过诱导分化后，部分细胞呈神经元核抗原或胶质纤维酸性蛋白阳性，证明实验中提取分离的细胞为NSCs。BrdU细胞渗入实验法显示实验组细胞增殖率为1.56±0.03，明显高于对照组(1.04±0.04)，差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting实验显示4 h和8 h时实验组β-catenin蛋白相对表达量分别为1.09±0.10、1.20±0.13，对照组分别为0.56±0.05、0.83±0.04，实验组明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。
结论Rspo3蛋白可在体外促进小鼠NSCs增殖，其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。