【摘 要】
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为了探讨Lmo4基因对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的调控作用.转录调节因子Lmo4与细胞的成骨分化有着密切的联系,本实验通过包装靶向Lmo4的sgRNA慢病毒转染表达Cas9蛋白的
【机 构】
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上海交通大学生命科学技术学院,上海,200240
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为了探讨Lmo4基因对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的调控作用.转录调节因子Lmo4与细胞的成骨分化有着密切的联系,本实验通过包装靶向Lmo4的sgRNA慢病毒转染表达Cas9蛋白的骨髓间充质干细胞,运用CRISPR/Cas9技术敲除Lmo4,同时设置sgRNA空载体病毒作为阴性对照;包装Lmo4的pMSCV逆转录病毒转染野生型骨髓间充质干细胞,过表达Lmo4,同时以pMSCV空载体病毒作为阴性对照.对病毒转染后的细胞进行成骨诱导分化,采用碱性磷酸酶染色和茜素红S染色两种方法对各组细胞进行染色,并运用实时荧光定量PCR技术对细胞的Lmo4基因,以及成骨分化相关基因Runx2、ALP、Col1a1、Osteocolcin的表达水平进行定量分析,比较各组细胞成骨能力的差异.结果 显示,Lmo4敲除组与对照组相比,两种染色明显加深,Lmo4的表达量明显下降,成骨分化相关基因Runx2、ALP、 Col1a1、Osteocalcin的表达量明显上升.相反,Lmo4过表达的细胞与对照组相比,两种染色明显变浅,Lmo4的表达量明显上升,成骨分化相关基因的表达量明显下降.说明Lmo4能够抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化.本研究发现了一个新的骨发育与分化的调控因子.
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