Bacillus sp.C3细胞色素P450CYP102A16酶活性研究

来源 :浙江大学学报(农业与生命科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:fgh000000
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通过异源表达及Ni-NTA亲和层析纯化获得重组Bacillus sp.C3细胞色素P450 CYP102A16蛋白;以CYP102A16纯酶为研究对象,系统研究温度、pH、有机溶剂、表面活性剂、金属和非金属离子等对该酶活性及其稳定性的影响;用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)消减法测定CYP102A16的酶活性.结果表明:CYP102A16的最适反应温度为35℃,最适反应pH为6.5~7.5,该酶在45℃以下、pH 5.0~10.0的范围内稳定;CYP102A16能完全耐受20%二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)、30%甲醇、10%乙醇和20%丙酮,经10%乙腈、正丙醇和异丙醇处理后残余酶活性在45%以上,经10%正丁醇处理几乎失活;添加低质量浓度氯代十六烷基吡啶(cetylpyridine chloride,CPC) (0.003~0.02 g/L)和聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100) (0.1~0.2 g/L) 可使CYP102A16酶活性分别提高40%和60%左右,而添加低质量浓度十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulphate,SDS) (0.004~0.008 g/L)对该酶活性无显著影响;1~20 mmol/L K+、20~50 mmol/L Na+、0.05 mmol/LCd2+对CYP102A16酶活性表现出轻微的促进效应,NH4+、Ca2+、Mg2+、Fe3+、C o2+、Mn2+、Zn2+、Cu2+和乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)均能不同程度地抑制CYP102A16的活性,在离子浓度为1~100mmol/L时抑制效应表现为Ca2+> Mg2+> NH4+> EDTA,抑制作用的大小总体上与离子浓度呈正相关.
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