【摘 要】
：
通过异源表达及Ni-NTA亲和层析纯化获得重组Bacillus sp.C3细胞色素P450 CYP102A16蛋白；以CYP102A16纯酶为研究对象,系统研究温度、pH、有机溶剂、表面活性剂、金属和非金属离
【机 构】
：
浙江大学生命科学学院植物科学研究所,浙江大学生命科学学院微生物研究所
论文部分内容阅读
通过异源表达及Ni-NTA亲和层析纯化获得重组Bacillus sp.C3细胞色素P450 CYP102A16蛋白；以CYP102A16纯酶为研究对象,系统研究温度、pH、有机溶剂、表面活性剂、金属和非金属离子等对该酶活性及其稳定性的影响；用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)消减法测定CYP102A16的酶活性.结果表明:CYP102A16的最适反应温度为35℃,最适反应pH为6.5～7.5,该酶在45℃以下、pH 5.0～10.0的范围内稳定；CYP102A16能完全耐受20％二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)、30％甲醇、10％乙醇和20％丙酮,经10％乙腈、正丙醇和异丙醇处理后残余酶活性在45％以上,经10％正丁醇处理几乎失活;添加低质量浓度氯代十六烷基吡啶(cetylpyridine chloride,CPC) (0.003～0.02 g/L)和聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100) (0.1～0.2 g/L) 可使CYP102A16酶活性分别提高40％和60％左右,而添加低质量浓度十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulphate,SDS) (0.004～0.008 g/L)对该酶活性无显著影响；1～20 mmol/L K+、20～50 mmol/L Na+、0.05 mmol/LCd2+对CYP102A16酶活性表现出轻微的促进效应,NH4+、Ca2+、Mg2+、Fe3+、C o2+、Mn2+、Zn2+、Cu2+和乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)均能不同程度地抑制CYP102A16的活性,在离子浓度为1～100mmol/L时抑制效应表现为Ca2+＞ Mg2+＞ NH4+＞ EDTA,抑制作用的大小总体上与离子浓度呈正相关.
其他文献
目的：观察止凝血分子标志物在老年冠心病（ CAD）合并高血压（ HP）中的变化并探讨其临床意义。方法选择老年CAD患者116例，其中稳定性心绞痛（SAP）患者36例（SAP组），不稳定性心绞痛（UAP）患者38例
目的探讨磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)在结肠癌组织、腺瘤组织和切缘黏膜组织中的表达与结肠癌不同临床病理特征的关系。方法收集唐山市工人医院的86例结肠腺癌标本为腺癌组
目的研究直肠癌组织中SLP-2基因的表达情况。方法应用免疫组化法及RT-PCR法检测40对直肠癌及其癌旁正常直肠组织中SLP-2蛋白及mRNA的表达情况,分析直肠癌病例临床病理特征与S
近年来,随着医学相关学科的迅猛发展,组织工程技术已经取得了很大的成就,但种子细胞一直是困扰人们的焦点问题.脂肪干细胞(ADSCs)体外扩增迅速,稳定性好,无免疫排斥反应,具有
基于表达序列标签(ESTs)和基因组数据库的电子克隆(in silico cloning)策略,是近年发展起来的一门基因克隆的新技术.其技术核心是利用生物信息学技术组装延伸ESTs序列,获得基
目的 准确预测蛋白质结构类,为研究其空间结构及生物功能打下基础.方法 应用隐马尔可夫模型(HMM)预测蛋白质结构类,分别构建3-状态HMM和8-状态HMM.数据来源于Chou和Zhou构建
目的 研究超顺磁氧化铁(SPIO)标记对大鼠脂肪干细胞(ADSCs)向肝样细胞诱导分化的影响.方法 0.25％Ⅱ型胶原酶消化SD大鼠脂肪组织,获取原代ADSCs.采用多聚赖氨酸(PLL)介导SPIO(2
目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、AMD3100对大鼠间充质干细胞(MSCs)增殖、迁移和黏附的影响.方法 采用MTT比色法、Transwell迁移法和黏附试验分别检测体外G-CSF、AMD310
目的 观察纳米纤维载体/胶原凝胶复合体外肝细胞培养效果.方法 超声振荡制备胶原/丝素纳米纤维载体,与胶原凝胶复合体外培养人肝癌HepG2细胞12d,测定细胞功能.结果 纳米纤维
实验采集了华东师范大学在校学生皮肤表面的细菌样品,通过Baird Parker培养基选择性分离葡萄球菌属菌株.对分离到的菌株进行染色体DNA的提取,并扩增16S rRNA基因；通过16S rRNA