【摘 要】
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目的 探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对缺氧/复氧(H/R)诱导大鼠心肌细胞(H9c2细胞)能量代谢重编程的影响及机制.方法 常规培养H9c2细胞,细胞贴壁后随机分组.空白对照组正常培养,缺氧/复氧组(H/R组)放至95％N2+5％CO2培养箱缺氧3 h、95％O2+5％CO2培养箱复氧3 h.H/R+黄芪甲苷低剂量组(H/R+AS-ⅣL组)、H/R+黄芪甲苷高剂量组(H/R+AS-ⅣH组)分别加入800、1600μmol/L干预6 h后再H/R处理;H/R+黄芪甲苷高剂量+腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂组
【机 构】
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南京中医药大学第三临床学院,南京210028;南京中医药大学第三临床学院,南京210028;南京中医药大学附属中西医结合医院心血管科
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目的 探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对缺氧/复氧(H/R)诱导大鼠心肌细胞(H9c2细胞)能量代谢重编程的影响及机制.方法 常规培养H9c2细胞,细胞贴壁后随机分组.空白对照组正常培养,缺氧/复氧组(H/R组)放至95％N2+5％CO2培养箱缺氧3 h、95％O2+5％CO2培养箱复氧3 h.H/R+黄芪甲苷低剂量组(H/R+AS-ⅣL组)、H/R+黄芪甲苷高剂量组(H/R+AS-ⅣH组)分别加入800、1600μmol/L干预6 h后再H/R处理;H/R+黄芪甲苷高剂量+腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂组(H/R+AS-ⅣH+AMPKI组)加入AS-Ⅳ1600μmol/L干预6 h+10μmol/L Com-pound C干预2 h后再行H/R处理.用紫外分光度法检测各组二磷酸腺苷(ADP)、三磷酸腺苷(ATP)、乙酰辅酶A(Acetyl-CoA),Seahorse XF能量代谢分析法检测细胞外酸化率(ECAR)、氧气消耗速率(OCR),用qRT-PCR检测细胞内AMPK mRNA表达,用Western blotting法检测细胞内AMPKα、磷酸化AMPKα(p-AMPKα)蛋白表达.结果 与空白对照组比较,H/R组ADP、ATP低,Acetyl-CoA高,ECAR高,AMPK mRNA及AMPKα、p-AMPKα蛋白相对表达量低(P均<0.05);与H/R组比较,H/R+AS-ⅣL组、H/R+AS-ⅣH组ADP、ATP高,Acetyl-CoA低,OCR高,ECAR低,AMPK mRNA及AMPKα、p-AMPKα蛋白相对表达量高(P均<0.05);与H/R+AS-IVH组比较,H/R+AS-ⅣH+AMPKI组ADP、ATP低,Acetyl-CoA高,OCR低,ECAR高,AMPK mRNA及AMPKα、p-AMPKα蛋白相对表达量低(P均<0.05).结论 黄芪甲苷可改善H/R诱导的大鼠心肌细胞能量代谢重编程,其作用机制可能与激活AMPK信号有关.
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