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摘要[目的]研究费约果叶片槲皮素提取工艺，优选最佳提取条件。[方法]以提取率、槲皮素收率和槲皮素纯度为指标，采用单因素试验法，考察提取溶剂、提取温度、提取时间、料液比和提取次数对费约果叶片槲皮素收率的影响，优选出最佳提取工艺条件。[结果]最佳槲皮素提取工艺是在50 ℃条件下，将费约果叶片粉末置于10倍90%乙醇中回流提取4次，每次2 h，提取率、槲皮素收率、槲皮素纯度分别为3.486%、0.0334%、0.958%。[结论]此法高效、成本低、操作方便、工艺简单，为费约果叶片槲皮素提取工艺的进一步研究提供了依据。
关键词费约果叶片；槲皮素；提取工艺
中图分类号S667.9文献标识码A文章编号0517-6611（2014）36-12881-02
Abstract[Objective] To determine the optimal extraction technology of quercetin from the leaves of Feijoa sellowiana Berg. [Method] Taking extraction rate， purity and yield of quercetin as the indices， effects of extraction solvent， extraction temperature， extraction time， solid to liquid ratio and extraction times on the extraction rate of quercetin were studied. And the optimal extraction technology was selected. [Result] The optimal extraction technology was as follow： leaves of Feijoa sellowiana Berg powder was added into 90% alcohol with the ratio of l∶ 10 （g/ml） under 50 ℃， the leaves was by reflux extraction for 4 times with each time for 2 h. The extraction rate， extraction rate of quercetin， and purity of quercetin were 3.486%，0.033 4%and 0.958%， respectively. [Conclusion] The extraction technology was efficient， economical， convenient and this study provided a scientific basis for optimizing the extraction technology of quercetin.
Key wordsLeaves of Feijoa sellowiana Berg； Quercetin； Extraction technique
费约果（Feijoa sellowiana Berg）又名凤梨番石榴、巴西番石榴、无花果番石榴，系桃金娘科费约果属常绿灌木或小乔木。费约果叶片主要化学成分包括维生素E、黄酮、豆甾醇、β-胡萝卜素、对羟基苯乙醇和多酚类成分[1]，具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、增强免疫和抗炎等药理作用[2]。费约果叶片中含有丰富的黄酮物质，研究表明，黄酮类化合物能防治心脑血管系统和呼吸系统疾病，具有抗炎抑菌、降低血糖以及增强免疫功能等药理作用[3-4]。槲皮素是黄酮类化合物中最具代表性的生理活性物质之一，其在天然产物中以单体和苷的形式大量存在。近年来研究表明槲皮素具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗自由基以及保护血管等[5-6]。目前对费约果叶片槲皮素提取工艺研究的文献尚未见报道。笔者采用HPLC分析法，以提取率、槲皮素收率、槲皮素纯度为指标，采用单因素试验比较了不同提取因素对费约果叶片槲皮素提取的影响，以期为费约果叶片的开发利用提供了理论参考和试验指导。
1材料与方法
1.1材料
费约果叶片于2013年9月中旬由四川乐山同泰生物科技有限公司提供。
1.2仪器与试剂
旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），高效液相色谱仪（美国Agilent公司）。槲皮素标准品（批号111566200402，中国药品生物制品检定所），甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为国产分析纯。
1.3方法
1.3.1槲皮素含量的测定。
1.3.1.1色谱条件。
色谱柱为XDB C18（4.5×150 mm，5 μm）；流动相为甲醇∶0.1%磷酸溶液（60∶40），柱温25 ℃，检测波长360 nm，流速0.6 ml/min。
1.3.1.2标准曲线绘制。
称取槲皮素标准品4.8 mg，置于10 ml 容量瓶中，加甲醇溶液并定容至刻度，然后精密吸取5 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度。如此反复再稀释2次。分别吸取25 μl 注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积的积分值（y）为纵坐标、槲皮素浓度（x）为横坐标进行线性回归，得回归方程为y=56 296x-202.77（r2=0999 8）。
1.3.2单因素试验。
1.3.2.1提取溶剂的选择。
取费约果叶片粉末（60目）5 g，提取溶剂分别用10倍粉末量的水，20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇，pH=8、10、13的NaOH溶液，50 ℃下回流提取2 h。抽滤，滤渣用相应溶剂洗涤，合并并浓缩滤液，置于10 ml容量瓶中，定容，摇匀，得供试品溶液。平行提取3次。然后分别吸取25 μl 注入液相色谱仪，测槲皮素含量，计算收率和纯度。 1.3.2.2提取温度的选择。
取费约果叶片粉末（60目）5 g，提取溶剂为10倍粉末量的90%乙醇，分别在40、50、60、70、80、90 ℃下回流提取2 h。抽滤，滤渣用相应溶剂洗涤，合并并浓缩滤液，置于10 ml容量瓶中，定容，摇匀，得供试品溶液。平行提取3次。然后分别吸取25 μl注入液相色谱仪，测槲皮素含量，计算收率和纯度。
1.3.2.3提取时间的选择。
取费约果叶片粉末（60目）5 g，提取溶剂为10倍粉末量的90%乙醇，50 ℃下分别回流提取1、2、3、4、5 h。抽滤，滤渣用相应溶剂洗涤，合并并浓缩滤液，置于10 ml容量瓶中，定容，摇匀，得供试品溶液。平行提取3次。然后分别吸取25 μl 注入液相色谱仪，测槲皮素含量，计算收率和纯度。
2结果与分析
2.1提取溶剂对费约果叶片槲皮素提取的影响
由表1可见，使用乙醇作为溶剂时的提取效果比水和碱水作为溶剂的提取效果好。当乙醇浓度在20%～60%时，随着乙醇浓度的不断增大，槲皮素的收率也增大；当乙醇浓度在60%～100%时，随着乙醇浓度的不断增大，槲皮素的收率不断减小，当乙醇浓度达100%时，高效液相色谱仪未检测出槲皮素。当乙醇浓度达60%时，槲皮素的收率最大，但水溶性杂质也容易被提取出来，导致其纯度较低。因此，综合槲皮素的收率和纯度来考虑，确定提取溶剂为90%乙醇。
2.2提取温度对费约果叶片槲皮素提取的影响
从表2可以看出，随着提取温度的升高，槲皮素收率呈上升趋势，当温度达90 ℃时，槲皮素收率最大，但其纯度较低，其他水溶性杂质含量高多。因此，综合槲皮素的收率和纯度来考虑，确定提取温度为50 ℃。
2.3提取时间对费约果叶片槲皮素提取的影响
由表3可见，随着提取时间的增长，槲皮素收率呈上升趋势，但其变化不大，可能是此因素不是提取槲皮素的主要因素。因此，综合槲皮素的收率和纯度来考虑，确定提取时间为2 h。
2.4料液比对费约果叶片槲皮素提取的影响
试验结果表明（表4），随着固液比增加，槲皮素的收率增加较为明显，当提取料液比达1∶10以后，收率增加较小。综合槲皮素的收率和纯度来考虑，因此确定最佳料液比为1∶10。
2.5提取次数对费约果叶片槲皮素提取的影响
从表5可以看出，随着提取次数增加，提取率、槲皮素的收率增加，纯度也在增加。但提取次数分别为4次、5次时，提取率、槲皮素的收率及纯度变化不大。考虑试验实际情况，因此最佳提取次数为4次。
3讨论
综上所述，最佳槲皮素的提取工艺为在50 ℃条件下，将费约果叶片粉末置于10倍90%乙醇中回流提取4次，每次2 h，提取率、槲皮素收率、槲皮素纯度分别为3.486%、0033 4%、0.958%。通过验证试验发现，其结果与预测结果接近，表明该提取工艺稳定、可行。现有技术中，尚未见有费约果叶片槲皮素提取技术的报道。同时该试验也为今后费约果叶片的开发利用提供了理论参考和实验指导。
参考文献
[1] DAVID B D.FeijoasOrigins，Cultivation and uses[M].New Zealand：The Horticucture and Food Research Institute of New Zealand Ltd.，2002：7-79.
[2] VUOTTO M L，BASILE A，MOSCATIELLO V，et al.Antimicrobial and antioxidant activities of Feijoa sellowiana fruit[J].Int J Antimicrob Agents，2000，13（3）：197-201.
[3] 宋慧，李勇.黄酮类化合物的保健作用[J].中国食物与营养，2004（11）：45-47.
[4] 曹纬国，刘志勤，邵云，等.黄酮类化合物药理作用的研究进展[J].西北植物学报，2003，3（12）：2241-2247.
[5] 陈辉.槲皮素的心血管保护作用[J].国际心血管病杂志，2007，34（2）：57-59.
[6] 舒毅，谭陶，张恩字，等.槲皮素的药理学研究进展[J].华西药学杂志，2008，23（6）：689-691.
关键词费约果叶片；槲皮素；提取工艺
中图分类号S667.9文献标识码A文章编号0517-6611（2014）36-12881-02
Abstract[Objective] To determine the optimal extraction technology of quercetin from the leaves of Feijoa sellowiana Berg. [Method] Taking extraction rate， purity and yield of quercetin as the indices， effects of extraction solvent， extraction temperature， extraction time， solid to liquid ratio and extraction times on the extraction rate of quercetin were studied. And the optimal extraction technology was selected. [Result] The optimal extraction technology was as follow： leaves of Feijoa sellowiana Berg powder was added into 90% alcohol with the ratio of l∶ 10 （g/ml） under 50 ℃， the leaves was by reflux extraction for 4 times with each time for 2 h. The extraction rate， extraction rate of quercetin， and purity of quercetin were 3.486%，0.033 4%and 0.958%， respectively. [Conclusion] The extraction technology was efficient， economical， convenient and this study provided a scientific basis for optimizing the extraction technology of quercetin.
Key wordsLeaves of Feijoa sellowiana Berg； Quercetin； Extraction technique
费约果（Feijoa sellowiana Berg）又名凤梨番石榴、巴西番石榴、无花果番石榴，系桃金娘科费约果属常绿灌木或小乔木。费约果叶片主要化学成分包括维生素E、黄酮、豆甾醇、β-胡萝卜素、对羟基苯乙醇和多酚类成分[1]，具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、增强免疫和抗炎等药理作用[2]。费约果叶片中含有丰富的黄酮物质，研究表明，黄酮类化合物能防治心脑血管系统和呼吸系统疾病，具有抗炎抑菌、降低血糖以及增强免疫功能等药理作用[3-4]。槲皮素是黄酮类化合物中最具代表性的生理活性物质之一，其在天然产物中以单体和苷的形式大量存在。近年来研究表明槲皮素具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗自由基以及保护血管等[5-6]。目前对费约果叶片槲皮素提取工艺研究的文献尚未见报道。笔者采用HPLC分析法，以提取率、槲皮素收率、槲皮素纯度为指标，采用单因素试验比较了不同提取因素对费约果叶片槲皮素提取的影响，以期为费约果叶片的开发利用提供了理论参考和试验指导。
1材料与方法
1.1材料
费约果叶片于2013年9月中旬由四川乐山同泰生物科技有限公司提供。
1.2仪器与试剂
旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），高效液相色谱仪（美国Agilent公司）。槲皮素标准品（批号111566200402，中国药品生物制品检定所），甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为国产分析纯。
1.3方法
1.3.1槲皮素含量的测定。
1.3.1.1色谱条件。
色谱柱为XDB C18（4.5×150 mm，5 μm）；流动相为甲醇∶0.1%磷酸溶液（60∶40），柱温25 ℃，检测波长360 nm，流速0.6 ml/min。
1.3.1.2标准曲线绘制。
称取槲皮素标准品4.8 mg，置于10 ml 容量瓶中，加甲醇溶液并定容至刻度，然后精密吸取5 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度。如此反复再稀释2次。分别吸取25 μl 注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积的积分值（y）为纵坐标、槲皮素浓度（x）为横坐标进行线性回归，得回归方程为y=56 296x-202.77（r2=0999 8）。
1.3.2单因素试验。
1.3.2.1提取溶剂的选择。
取费约果叶片粉末（60目）5 g，提取溶剂分别用10倍粉末量的水，20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇，pH=8、10、13的NaOH溶液，50 ℃下回流提取2 h。抽滤，滤渣用相应溶剂洗涤，合并并浓缩滤液，置于10 ml容量瓶中，定容，摇匀，得供试品溶液。平行提取3次。然后分别吸取25 μl 注入液相色谱仪，测槲皮素含量，计算收率和纯度。 1.3.2.2提取温度的选择。
取费约果叶片粉末（60目）5 g，提取溶剂为10倍粉末量的90%乙醇，分别在40、50、60、70、80、90 ℃下回流提取2 h。抽滤，滤渣用相应溶剂洗涤，合并并浓缩滤液，置于10 ml容量瓶中，定容，摇匀，得供试品溶液。平行提取3次。然后分别吸取25 μl注入液相色谱仪，测槲皮素含量，计算收率和纯度。
1.3.2.3提取时间的选择。
取费约果叶片粉末（60目）5 g，提取溶剂为10倍粉末量的90%乙醇，50 ℃下分别回流提取1、2、3、4、5 h。抽滤，滤渣用相应溶剂洗涤，合并并浓缩滤液，置于10 ml容量瓶中，定容，摇匀，得供试品溶液。平行提取3次。然后分别吸取25 μl 注入液相色谱仪，测槲皮素含量，计算收率和纯度。
2结果与分析
2.1提取溶剂对费约果叶片槲皮素提取的影响
由表1可见，使用乙醇作为溶剂时的提取效果比水和碱水作为溶剂的提取效果好。当乙醇浓度在20%～60%时，随着乙醇浓度的不断增大，槲皮素的收率也增大；当乙醇浓度在60%～100%时，随着乙醇浓度的不断增大，槲皮素的收率不断减小，当乙醇浓度达100%时，高效液相色谱仪未检测出槲皮素。当乙醇浓度达60%时，槲皮素的收率最大，但水溶性杂质也容易被提取出来，导致其纯度较低。因此，综合槲皮素的收率和纯度来考虑，确定提取溶剂为90%乙醇。
2.2提取温度对费约果叶片槲皮素提取的影响
从表2可以看出，随着提取温度的升高，槲皮素收率呈上升趋势，当温度达90 ℃时，槲皮素收率最大，但其纯度较低，其他水溶性杂质含量高多。因此，综合槲皮素的收率和纯度来考虑，确定提取温度为50 ℃。
2.3提取时间对费约果叶片槲皮素提取的影响
由表3可见，随着提取时间的增长，槲皮素收率呈上升趋势，但其变化不大，可能是此因素不是提取槲皮素的主要因素。因此，综合槲皮素的收率和纯度来考虑，确定提取时间为2 h。
2.4料液比对费约果叶片槲皮素提取的影响
试验结果表明（表4），随着固液比增加，槲皮素的收率增加较为明显，当提取料液比达1∶10以后，收率增加较小。综合槲皮素的收率和纯度来考虑，因此确定最佳料液比为1∶10。
2.5提取次数对费约果叶片槲皮素提取的影响
从表5可以看出，随着提取次数增加，提取率、槲皮素的收率增加，纯度也在增加。但提取次数分别为4次、5次时，提取率、槲皮素的收率及纯度变化不大。考虑试验实际情况，因此最佳提取次数为4次。
3讨论
综上所述，最佳槲皮素的提取工艺为在50 ℃条件下，将费约果叶片粉末置于10倍90%乙醇中回流提取4次，每次2 h，提取率、槲皮素收率、槲皮素纯度分别为3.486%、0033 4%、0.958%。通过验证试验发现，其结果与预测结果接近，表明该提取工艺稳定、可行。现有技术中，尚未见有费约果叶片槲皮素提取技术的报道。同时该试验也为今后费约果叶片的开发利用提供了理论参考和实验指导。
参考文献
[1] DAVID B D.FeijoasOrigins，Cultivation and uses[M].New Zealand：The Horticucture and Food Research Institute of New Zealand Ltd.，2002：7-79.
[2] VUOTTO M L，BASILE A，MOSCATIELLO V，et al.Antimicrobial and antioxidant activities of Feijoa sellowiana fruit[J].Int J Antimicrob Agents，2000，13（3）：197-201.
[3] 宋慧，李勇.黄酮类化合物的保健作用[J].中国食物与营养，2004（11）：45-47.
[4] 曹纬国，刘志勤，邵云，等.黄酮类化合物药理作用的研究进展[J].西北植物学报，2003，3（12）：2241-2247.
[5] 陈辉.槲皮素的心血管保护作用[J].国际心血管病杂志，2007，34（2）：57-59.
[6] 舒毅，谭陶，张恩字，等.槲皮素的药理学研究进展[J].华西药学杂志，2008，23（6）：689-691.