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【摘 要】 目的：建立高效液相色谱法测定血栓通注射液中5-羟甲基糠醛的含量。方法：色谱柱为CAPCELLPAK C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（10∶90）；流速为0.8ml/min，柱温25℃，检测波长284nm。结果：5-羟甲基糠醛进样量在0.0677～270.8ng内呈良好的线性关系（r=1.0000），平均回收率为103.07%，RSD为2.8%。结论：本方法简便、灵敏、准确可靠，专属性强。
【关键词】 血栓通注射液；5-羟甲基糠醛；高效液相色谱法
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2014）06-0031-02
血栓通注射液中主要成分为三七的块根提取物，三七药材中含有的部分皂苷类成分都是苷元与葡萄糖结合，在提取、纯化过程中有可能发生水解，产生部分葡萄糖。5-羟甲基糠醛（5-HMF）是葡萄糖等单糖化合物在高温或弱酸等条件下脱水产生的一个醛类化合物，有报道称该化合物有可能引发并促进结肠小囊异常生长[1]及具有一定程度的基因毒性[2]。因此，医药、食品等工业中往往对其产品进行5-HMF含量的控制。本文采用高效液相色谱法对血栓通注射液中的5-HMF进行测定，为该制剂的安全性评价提供参考。
1 仪器与材料
1.1 仪器 Agjlent 1100高效液相色谱仪；色谱柱为CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）。
1.2 药品与试剂 5-羟甲基糠醛（5-HMF）对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号：111626-200301）；血栓通注射液为随机抽取国内各生产企业的样品。甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）；以甲醇-0.1%磷酸溶液（10：90）为流动相；流速：0.8ml/min，柱温：25℃，检测波长为284nm。
2.2 溶液的配制 对照品溶液的配制：取5-HMF对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含1μg的溶液，即得。供试品溶液直接取样品进样。
2.3 标准曲线的制备 取5-HMF对照品7 mg，精密称定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取上述贮备液0.5、1.0、1.0、10ml分别置50、20、5、10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得曲线2、3、4、5，再精密量取曲线2溶液0.5ml置20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得曲线1。将上述对照品溶液按上述色谱条件分别进样10μl，以进样量（ng）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算出线性方程Y=1.1804×10X+1.2421，r=1.0000。结果表明5-HMF对照品进样量在0.0677～270.8ng范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验 取同一份血栓通注射液供试品按上述色谱条件，连续测定5次。记录5-HMF峰面积，RSD为1.7%，表明本法的精密度良好。
2.5 重复性试验 取同一批血栓通注射液供试品溶液按上述方法平行测定6份，计算5-HMF含量， RSD为2.9%，结果表明，本法的重现性较好。
2.6 稳定性试验 取同一份血栓通注射液供试品溶液按上述色谱条件，每隔一定时间测定一次，共考察13小时，计算5-HMF峰面积，RSD为1.4%。结果表明，供试品溶液至少在13小时内稳定。
2.7 回收率试验 精密量取已知含量的血栓通注射液1ml共6份，置2ml量瓶中，分别精密加入2.3项下2号曲线对照品溶液0.1ml，加水至刻度，测定，计算加样回收率，结果5-HMF平均回收率为103.07%，RSD为2.8%。
2.8 样品含量测定 按拟订的含量测定方法，测定了34批市售血栓通注射液样品，5-HMF的含量在0.009μg/ml～1.375μg/ml之间。
3 讨论
根据药典会公示品种冠心宁注射液每日允许5-HMF的注射量为4～8mg及本品静脉滴注1次用量2～5ml、一日1～2次进行折算，拟定血栓通注射液中5-HMF的含量限度为：每1ml所含5-HMF不得大于0.80mg。因此，按以上限度进行判断，所测定的34批样品中5-HMF的含量均远低于此限度，说明血栓通注射液样品的安全性有保障。
参考文献
[1] Zhang XM，Chan CC，Stamp D，et a1.Initiation and promotion of colonic aberrant crypt foci in rats by 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde in thermolyzed sucrose[J].Carcinogenesis，1993，14（4）：773-775.
[2]Surh YJ，Tannenbaum SR.Activation of the Maillard reaction product 5-（hydroxymethyl）furfural to strong mutagens via allylic sulfonation and chlorination[J].Chem Res Toxicol，1994，7（3）：313-318.
【关键词】 血栓通注射液；5-羟甲基糠醛；高效液相色谱法
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2014）06-0031-02
血栓通注射液中主要成分为三七的块根提取物，三七药材中含有的部分皂苷类成分都是苷元与葡萄糖结合，在提取、纯化过程中有可能发生水解，产生部分葡萄糖。5-羟甲基糠醛（5-HMF）是葡萄糖等单糖化合物在高温或弱酸等条件下脱水产生的一个醛类化合物，有报道称该化合物有可能引发并促进结肠小囊异常生长[1]及具有一定程度的基因毒性[2]。因此，医药、食品等工业中往往对其产品进行5-HMF含量的控制。本文采用高效液相色谱法对血栓通注射液中的5-HMF进行测定，为该制剂的安全性评价提供参考。
1 仪器与材料
1.1 仪器 Agjlent 1100高效液相色谱仪；色谱柱为CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）。
1.2 药品与试剂 5-羟甲基糠醛（5-HMF）对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号：111626-200301）；血栓通注射液为随机抽取国内各生产企业的样品。甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）；以甲醇-0.1%磷酸溶液（10：90）为流动相；流速：0.8ml/min，柱温：25℃，检测波长为284nm。
2.2 溶液的配制 对照品溶液的配制：取5-HMF对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含1μg的溶液，即得。供试品溶液直接取样品进样。
2.3 标准曲线的制备 取5-HMF对照品7 mg，精密称定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取上述贮备液0.5、1.0、1.0、10ml分别置50、20、5、10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得曲线2、3、4、5，再精密量取曲线2溶液0.5ml置20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得曲线1。将上述对照品溶液按上述色谱条件分别进样10μl，以进样量（ng）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算出线性方程Y=1.1804×10X+1.2421，r=1.0000。结果表明5-HMF对照品进样量在0.0677～270.8ng范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验 取同一份血栓通注射液供试品按上述色谱条件，连续测定5次。记录5-HMF峰面积，RSD为1.7%，表明本法的精密度良好。
2.5 重复性试验 取同一批血栓通注射液供试品溶液按上述方法平行测定6份，计算5-HMF含量， RSD为2.9%，结果表明，本法的重现性较好。
2.6 稳定性试验 取同一份血栓通注射液供试品溶液按上述色谱条件，每隔一定时间测定一次，共考察13小时，计算5-HMF峰面积，RSD为1.4%。结果表明，供试品溶液至少在13小时内稳定。
2.7 回收率试验 精密量取已知含量的血栓通注射液1ml共6份，置2ml量瓶中，分别精密加入2.3项下2号曲线对照品溶液0.1ml，加水至刻度，测定，计算加样回收率，结果5-HMF平均回收率为103.07%，RSD为2.8%。
2.8 样品含量测定 按拟订的含量测定方法，测定了34批市售血栓通注射液样品，5-HMF的含量在0.009μg/ml～1.375μg/ml之间。
3 讨论
根据药典会公示品种冠心宁注射液每日允许5-HMF的注射量为4～8mg及本品静脉滴注1次用量2～5ml、一日1～2次进行折算，拟定血栓通注射液中5-HMF的含量限度为：每1ml所含5-HMF不得大于0.80mg。因此，按以上限度进行判断，所测定的34批样品中5-HMF的含量均远低于此限度，说明血栓通注射液样品的安全性有保障。
参考文献
[1] Zhang XM，Chan CC，Stamp D，et a1.Initiation and promotion of colonic aberrant crypt foci in rats by 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde in thermolyzed sucrose[J].Carcinogenesis，1993，14（4）：773-775.
[2]Surh YJ，Tannenbaum SR.Activation of the Maillard reaction product 5-（hydroxymethyl）furfural to strong mutagens via allylic sulfonation and chlorination[J].Chem Res Toxicol，1994，7（3）：313-318.