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【摘要】目的:建立妇科凝胶中蛇床子素的HPLC测定方法。方法:采用高效液相色谱法,用Shimpack VP~ODS C18柱(150mm×4.6mm,5μm),以乙腈~水(60∶40)为流动相,流速:1.0mL.min-1,检测波长为323nm。结果:蛇床子素在7.2~57.6μg.mL-1,呈良好的线性关系(r =0.9999),平均回收率为99.14%,RSD=1.32%。结论:所建方法准确可靠,操作简便,稳定性好,可用于妇科凝胶的质量控制。
【关键词】HPLC法;妇科凝胶;蛇床子素
【中图分类号】R931.71【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)12-0020-01
妇科阴道炎是临床常见病、多发病之一,是由于妇女卵巢功能衰退、体内雌激素缺失,抵抗力衰退以及局部不洁所致的阴道炎症反应[1]。我院传统经验方妇科洗剂治疗各种妇科阴道炎症获较满意的较果,其由黄柏、苦参、蛇床子、鱼腥草、野菊花等中药组成,具有清热燥湿、泻火解毒、杀虫止痒等功效,临床用于治疗妇科各种阴道炎症。但存在体积大,使用不便等缺点,为更好地发挥妇科洗剂的临床疗效,提高其生物利用度,将该方的药材提取有效成分制备成新剂型妇科凝胶。为了控制该制剂质量,本文对处方主药之一蛇床子中蛇床子素的含量测定进行研究。
1仪器与试药
1.1仪器LC-20A高效液相色谱仪,SPD-20A紫外检测器,LC-20AT输液泵,LCsolution工作站(日本岛津公司);AL204电子天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司);双频数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);UV-1601紫外可见分光光度计(日本岛津公司)。
1.2试药蛇床子素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110822-200305,供含量测定用);乙腈为色谱纯;水为纯化水;其他试剂均为分析纯。妇科凝胶(本院自制,批号:20090415、20090416、20090417)。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱:Shimpack VP-ODS C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈~水(60∶40),流速:1.0mL.min-1,柱温:30℃,检测波长为323 nm,理论塔板数按蛇床子素峰计算应不低于3000。
2.2测定波长选择取蛇床子素对照品适量,加乙醇使溶解,用紫外分光光度计于200~400nm范围内扫描,结果表明,蛇床子素对照品在323nm波长处有最大吸收峰,因此选择波长323nm为测定波长。
2.3对照品溶液的制备 取蛇床子素对照品适量,精密称定,加乙醇制成每0.072mg.mL-1的溶液,即得。
2.4线性相关考察精密吸取对照品溶液1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 mL于10 mL量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取20μL进样,按“2.1”项下的色谱条件,以浓度(C)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标进行线性回归分析,得回归方程:A=83416190C+24359,r=0.9999,结果表明蛇床子素在7.2~57.6μg.mL-1范围内线性关系良好。
2.5供试品溶液的的制备取本品2.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加乙醇20 ml,称定重量,超声提取15 min,再称定重量,用乙醇补足减少的重量,过滤,即得。
2.6阴性对照试验取不含蛇床子的阴性样品,照供试品溶液的制备方法,制备阴性对照溶液。按“2.1”项下的色谱条件,分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL进样测定,结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上有一相同保留时间的色谱峰,而阴性对照溶液无干扰,见图1。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/mzmj/mzmj200912/mzmj20091211-1-l.jpg)
2.7精密度试验取同一浓度对照品溶液20μL,按“2.1”项下的色谱条件,重复进样6次,测得峰面积的RSD为1.08%,结果表明仪器精密度良好。
2.8稳定性试验取同一供试品溶液,分别在放置0、0.5、1、2、4、8h后,依法测定,结果RSD为1.36%,表明供试品溶液在8h内稳定。
2.9重复性试验取同一批样品,精密称定6份,按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液,按“2.1”项下的色谱条件测定,计算含量,RSD为1.52%。
2.10加样回收率试验精密称取已知含量的样品6份,每份约1.25g,各精密加入蛇床子素对照品,按“2.5”项下方法处理后,再按“2.1”项下色谱条件进样测定,各进样20μL,测得蛇床子素峰面积,计算回收率,详见表1。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/mzmj/mzmj200912/mzmj20091211-2-l.jpg)
2.11样品的测定取批号为20090415、20090416、20090417共3批妇科凝胶,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL,注入液相色谱仪,按“2.1”项下的色谱条件测定。按外标法计算蛇床子素含量,结果,3批样品的平均含量分别为0.25、0.20、0.18mg.g-1。
3讨论
3.1提取时间的选择本试验参考有关资料,样品用乙醇超声提取,并考察了超声提取时间对样品中蛇床子素提取的影响,结果用乙醇超声处理10、20、30min测定结果相近,为确保提取完全,故选择超声处理15min。
3.2流动相的选择曾参考相关文献,分别选用不同比例的甲醇-水,乙腈-水作为流动相进行试验,根据分离情况,甲醇~水作为流动相虽然经济实惠,但分离效果不是很理想,最后选择乙腈~水(60∶40)为流动相,可以使蛇床子素与其他成分很好地分离,峰型理想,且阴性对照无干扰。
(收稿日期:2009.03.10)
【关键词】HPLC法;妇科凝胶;蛇床子素
【中图分类号】R931.71【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)12-0020-01
妇科阴道炎是临床常见病、多发病之一,是由于妇女卵巢功能衰退、体内雌激素缺失,抵抗力衰退以及局部不洁所致的阴道炎症反应[1]。我院传统经验方妇科洗剂治疗各种妇科阴道炎症获较满意的较果,其由黄柏、苦参、蛇床子、鱼腥草、野菊花等中药组成,具有清热燥湿、泻火解毒、杀虫止痒等功效,临床用于治疗妇科各种阴道炎症。但存在体积大,使用不便等缺点,为更好地发挥妇科洗剂的临床疗效,提高其生物利用度,将该方的药材提取有效成分制备成新剂型妇科凝胶。为了控制该制剂质量,本文对处方主药之一蛇床子中蛇床子素的含量测定进行研究。
1仪器与试药
1.1仪器LC-20A高效液相色谱仪,SPD-20A紫外检测器,LC-20AT输液泵,LCsolution工作站(日本岛津公司);AL204电子天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司);双频数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);UV-1601紫外可见分光光度计(日本岛津公司)。
1.2试药蛇床子素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110822-200305,供含量测定用);乙腈为色谱纯;水为纯化水;其他试剂均为分析纯。妇科凝胶(本院自制,批号:20090415、20090416、20090417)。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱:Shimpack VP-ODS C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈~水(60∶40),流速:1.0mL.min-1,柱温:30℃,检测波长为323 nm,理论塔板数按蛇床子素峰计算应不低于3000。
2.2测定波长选择取蛇床子素对照品适量,加乙醇使溶解,用紫外分光光度计于200~400nm范围内扫描,结果表明,蛇床子素对照品在323nm波长处有最大吸收峰,因此选择波长323nm为测定波长。
2.3对照品溶液的制备 取蛇床子素对照品适量,精密称定,加乙醇制成每0.072mg.mL-1的溶液,即得。
2.4线性相关考察精密吸取对照品溶液1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 mL于10 mL量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取20μL进样,按“2.1”项下的色谱条件,以浓度(C)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标进行线性回归分析,得回归方程:A=83416190C+24359,r=0.9999,结果表明蛇床子素在7.2~57.6μg.mL-1范围内线性关系良好。
2.5供试品溶液的的制备取本品2.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加乙醇20 ml,称定重量,超声提取15 min,再称定重量,用乙醇补足减少的重量,过滤,即得。
2.6阴性对照试验取不含蛇床子的阴性样品,照供试品溶液的制备方法,制备阴性对照溶液。按“2.1”项下的色谱条件,分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL进样测定,结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上有一相同保留时间的色谱峰,而阴性对照溶液无干扰,见图1。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/mzmj/mzmj200912/mzmj20091211-1-l.jpg)
2.7精密度试验取同一浓度对照品溶液20μL,按“2.1”项下的色谱条件,重复进样6次,测得峰面积的RSD为1.08%,结果表明仪器精密度良好。
2.8稳定性试验取同一供试品溶液,分别在放置0、0.5、1、2、4、8h后,依法测定,结果RSD为1.36%,表明供试品溶液在8h内稳定。
2.9重复性试验取同一批样品,精密称定6份,按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液,按“2.1”项下的色谱条件测定,计算含量,RSD为1.52%。
2.10加样回收率试验精密称取已知含量的样品6份,每份约1.25g,各精密加入蛇床子素对照品,按“2.5”项下方法处理后,再按“2.1”项下色谱条件进样测定,各进样20μL,测得蛇床子素峰面积,计算回收率,详见表1。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/mzmj/mzmj200912/mzmj20091211-2-l.jpg)
2.11样品的测定取批号为20090415、20090416、20090417共3批妇科凝胶,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL,注入液相色谱仪,按“2.1”项下的色谱条件测定。按外标法计算蛇床子素含量,结果,3批样品的平均含量分别为0.25、0.20、0.18mg.g-1。
3讨论
3.1提取时间的选择本试验参考有关资料,样品用乙醇超声提取,并考察了超声提取时间对样品中蛇床子素提取的影响,结果用乙醇超声处理10、20、30min测定结果相近,为确保提取完全,故选择超声处理15min。
3.2流动相的选择曾参考相关文献,分别选用不同比例的甲醇-水,乙腈-水作为流动相进行试验,根据分离情况,甲醇~水作为流动相虽然经济实惠,但分离效果不是很理想,最后选择乙腈~水(60∶40)为流动相,可以使蛇床子素与其他成分很好地分离,峰型理想,且阴性对照无干扰。
(收稿日期:2009.03.10)