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【摘要】目的：建立妇科凝胶中蛇床子素的HPLC测定方法。方法：采用高效液相色谱法，用Shimpack VP～ODS C18柱(150mm×4.6mm,5μm)，以乙腈～水（60∶40）为流动相，流速：1.0mL.min-1，检测波长为323nm。结果:蛇床子素在7.2～57.6μg.mL-1，呈良好的线性关系（r =0.9999），平均回收率为99.14%，RSD=1.32%。结论：所建方法准确可靠，操作简便，稳定性好，可用于妇科凝胶的质量控制。
【关键词】HPLC法；妇科凝胶；蛇床子素
【中图分类号】R931.71【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)12-0020-01
妇科阴道炎是临床常见病、多发病之一，是由于妇女卵巢功能衰退、体内雌激素缺失，抵抗力衰退以及局部不洁所致的阴道炎症反应[1]。我院传统经验方妇科洗剂治疗各种妇科阴道炎症获较满意的较果，其由黄柏、苦参、蛇床子、鱼腥草、野菊花等中药组成，具有清热燥湿、泻火解毒、杀虫止痒等功效，临床用于治疗妇科各种阴道炎症。但存在体积大，使用不便等缺点，为更好地发挥妇科洗剂的临床疗效，提高其生物利用度，将该方的药材提取有效成分制备成新剂型妇科凝胶。为了控制该制剂质量，本文对处方主药之一蛇床子中蛇床子素的含量测定进行研究。
1仪器与试药
1.1仪器LC-20A高效液相色谱仪，SPD-20A紫外检测器，LC-20AT输液泵，LCsolution工作站（日本岛津公司）；AL204电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司）；双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV-1601紫外可见分光光度计（日本岛津公司）。
1.2试药蛇床子素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110822-200305，供含量测定用）；乙腈为色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。妇科凝胶（本院自制，批号：20090415、20090416、20090417）。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：Shimpack VP-ODS C18柱(150mm×4.6mm,5μm)，流动相：乙腈～水（60∶40），流速：1.0mL.min-1，柱温：30℃，检测波长为323 nm，理论塔板数按蛇床子素峰计算应不低于3000。
2.2测定波长选择取蛇床子素对照品适量，加乙醇使溶解，用紫外分光光度计于200～400nm范围内扫描，结果表明，蛇床子素对照品在323nm波长处有最大吸收峰，因此选择波长323nm为测定波长。
2.3对照品溶液的制备 取蛇床子素对照品适量，精密称定，加乙醇制成每0.072mg.mL-1的溶液，即得。
2.4线性相关考察精密吸取对照品溶液1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 mL于10 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20μL进样，按“2.1”项下的色谱条件，以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标进行线性回归分析，得回归方程：A=83416190C+24359，r=0.9999，结果表明蛇床子素在7.2～57.6μg.mL-1范围内线性关系良好。
2.5供试品溶液的的制备取本品2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醇20 ml，称定重量，超声提取15 min，再称定重量，用乙醇补足减少的重量，过滤，即得。
2.6阴性对照试验取不含蛇床子的阴性样品，照供试品溶液的制备方法，制备阴性对照溶液。按“2.1”项下的色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL进样测定，结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上有一相同保留时间的色谱峰，而阴性对照溶液无干扰，见图1。
2.7精密度试验取同一浓度对照品溶液20μL，按“2.1”项下的色谱条件，重复进样6次，测得峰面积的RSD为1.08%，结果表明仪器精密度良好。
2.8稳定性试验取同一供试品溶液，分别在放置0、0.5、1、2、4、8h后，依法测定，结果RSD为1.36%，表明供试品溶液在8h内稳定。
2.9重复性试验取同一批样品，精密称定6份，按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件测定，计算含量，RSD为1.52%。
2.10加样回收率试验精密称取已知含量的样品6份，每份约1.25g，各精密加入蛇床子素对照品，按“2.5”项下方法处理后，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，各进样20μL，测得蛇床子素峰面积，计算回收率，详见表1。
2.11样品的测定取批号为20090415、20090416、20090417共3批妇科凝胶，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下的色谱条件测定。按外标法计算蛇床子素含量，结果，3批样品的平均含量分别为0.25、0.20、0.18mg.g-1。
3讨论
3.1提取时间的选择本试验参考有关资料，样品用乙醇超声提取，并考察了超声提取时间对样品中蛇床子素提取的影响,结果用乙醇超声处理10、20、30min测定结果相近，为确保提取完全,故选择超声处理15min。
3.2流动相的选择曾参考相关文献，分别选用不同比例的甲醇-水，乙腈-水作为流动相进行试验，根据分离情况，甲醇～水作为流动相虽然经济实惠，但分离效果不是很理想，最后选择乙腈～水（60∶40）为流动相，可以使蛇床子素与其他成分很好地分离，峰型理想，且阴性对照无干扰。
(收稿日期：2009.03.10)
【关键词】HPLC法；妇科凝胶；蛇床子素
【中图分类号】R931.71【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)12-0020-01
妇科阴道炎是临床常见病、多发病之一，是由于妇女卵巢功能衰退、体内雌激素缺失，抵抗力衰退以及局部不洁所致的阴道炎症反应[1]。我院传统经验方妇科洗剂治疗各种妇科阴道炎症获较满意的较果，其由黄柏、苦参、蛇床子、鱼腥草、野菊花等中药组成，具有清热燥湿、泻火解毒、杀虫止痒等功效，临床用于治疗妇科各种阴道炎症。但存在体积大，使用不便等缺点，为更好地发挥妇科洗剂的临床疗效，提高其生物利用度，将该方的药材提取有效成分制备成新剂型妇科凝胶。为了控制该制剂质量，本文对处方主药之一蛇床子中蛇床子素的含量测定进行研究。
1仪器与试药
1.1仪器LC-20A高效液相色谱仪，SPD-20A紫外检测器，LC-20AT输液泵，LCsolution工作站（日本岛津公司）；AL204电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司）；双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV-1601紫外可见分光光度计（日本岛津公司）。
1.2试药蛇床子素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110822-200305，供含量测定用）；乙腈为色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。妇科凝胶（本院自制，批号：20090415、20090416、20090417）。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：Shimpack VP-ODS C18柱(150mm×4.6mm,5μm)，流动相：乙腈～水（60∶40），流速：1.0mL.min-1，柱温：30℃，检测波长为323 nm，理论塔板数按蛇床子素峰计算应不低于3000。
2.2测定波长选择取蛇床子素对照品适量，加乙醇使溶解，用紫外分光光度计于200～400nm范围内扫描，结果表明，蛇床子素对照品在323nm波长处有最大吸收峰，因此选择波长323nm为测定波长。
2.3对照品溶液的制备 取蛇床子素对照品适量，精密称定，加乙醇制成每0.072mg.mL-1的溶液，即得。
2.4线性相关考察精密吸取对照品溶液1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 mL于10 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20μL进样，按“2.1”项下的色谱条件，以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标进行线性回归分析，得回归方程：A=83416190C+24359，r=0.9999，结果表明蛇床子素在7.2～57.6μg.mL-1范围内线性关系良好。
2.5供试品溶液的的制备取本品2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醇20 ml，称定重量，超声提取15 min，再称定重量，用乙醇补足减少的重量，过滤，即得。
2.6阴性对照试验取不含蛇床子的阴性样品，照供试品溶液的制备方法，制备阴性对照溶液。按“2.1”项下的色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL进样测定，结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上有一相同保留时间的色谱峰，而阴性对照溶液无干扰，见图1。
2.7精密度试验取同一浓度对照品溶液20μL，按“2.1”项下的色谱条件，重复进样6次，测得峰面积的RSD为1.08%，结果表明仪器精密度良好。
2.8稳定性试验取同一供试品溶液，分别在放置0、0.5、1、2、4、8h后，依法测定，结果RSD为1.36%，表明供试品溶液在8h内稳定。
2.9重复性试验取同一批样品，精密称定6份，按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件测定，计算含量，RSD为1.52%。
2.10加样回收率试验精密称取已知含量的样品6份，每份约1.25g，各精密加入蛇床子素对照品，按“2.5”项下方法处理后，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，各进样20μL，测得蛇床子素峰面积，计算回收率，详见表1。
2.11样品的测定取批号为20090415、20090416、20090417共3批妇科凝胶，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下的色谱条件测定。按外标法计算蛇床子素含量，结果，3批样品的平均含量分别为0.25、0.20、0.18mg.g-1。
3讨论
3.1提取时间的选择本试验参考有关资料，样品用乙醇超声提取，并考察了超声提取时间对样品中蛇床子素提取的影响,结果用乙醇超声处理10、20、30min测定结果相近，为确保提取完全,故选择超声处理15min。
3.2流动相的选择曾参考相关文献，分别选用不同比例的甲醇-水，乙腈-水作为流动相进行试验，根据分离情况，甲醇～水作为流动相虽然经济实惠，但分离效果不是很理想，最后选择乙腈～水（60∶40）为流动相，可以使蛇床子素与其他成分很好地分离，峰型理想，且阴性对照无干扰。
(收稿日期：2009.03.10)