【摘 要】
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目的 探讨天冬氨酸组织蛋白酶(cathepsin D)及半胱氨酸组织蛋白酶(cathepsin K)在光老化成纤维细胞中的表达变化.方法 培养原代人皮肤成纤维细胞,在50 mg/L的8-甲氧沙林(8-MOP)培养基中避光孵育24 h后,用80 kJ/m~2 UVA照射,体外诱导培养细胞光老化.衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色证明老化诱导成功.Western印迹及实时定量RT-PCR
【机 构】
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510630,广州,中山大学附属第三医院皮肤性病科,510630,广州,中山大学附属第三医院皮肤性病科,510630,广州,中山大学附属第三医院皮肤性病科,510630,广州,中山大学附属第三医院皮肤
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目的 探讨天冬氨酸组织蛋白酶(cathepsin D)及半胱氨酸组织蛋白酶(cathepsin K)在光老化成纤维细胞中的表达变化.方法 培养原代人皮肤成纤维细胞,在50 mg/L的8-甲氧沙林(8-MOP)培养基中避光孵育24 h后,用80 kJ/m~2 UVA照射,体外诱导培养细胞光老化.衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色证明老化诱导成功.Western印迹及实时定量RT-PCR对比检测光老化成纤维细胞及正常成纤维细胞eathepsin K和cathepsin D蛋白及基因表达.结果 Western印迹结果显示,光老化组表达的cathepsin D的灰度值为3.25 4±0.33,对照组为14.18 ±2.25,t=30.61,P<0.01.两组间差异有统计学意义;光老化组表达的cathepsin K灰度值为2.39±0.66,对照组为29.38±4.62,t=12.63,P<0.01,两组差异有统计学意义.光老化组cathepsin D mRNA的△Ct值为2.79±0.17,对照组为4.54±0.34,根据2~(-△△Ct)值计算得eathepsin D mRNA在光老化组的表达下调为对照组的0.24±0.021(t=20.78,P<0.01);光老化组cathepsin K mRNA的△Ct值为-0.92±0.06,对照组为2.57±0.13,根据2~(△△Ct)值计算得cathepsin K mRNA在光老化组的表达下调为对照组的0.09±0.005(t=28.50,P<0.01).结论 cathepsin D及cathepsin K在光老化成纤维细胞中表达均下调。
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