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[摘 要] 目的：检测细胞粘附分子CD44在肾病综合征（Nephrotic syndrome，NS）、慢性肾小球肾炎（Chronic glomerulonephritis，CGN）患者外周血表达水平，探讨其临床意义。方法：选取我院2013年7月～2016年7月收治的57例NS患者、69例GGN患者及同期60名健康体检者，分别纳入NS组、GGN组及对照组，采用流式细胞仪检测3组受试者外周血单个核细胞CD44表达水平，并分析CD44表达水平与NS患者、GGN患者血浆白蛋白（ALB）、胆固醇（CE）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）的相关性。结果：CGN组患者外周血CD44表达水平高于NS组，NS组患者外周血CD44表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关分析示，外周血CD44表达水平与NS患者ALB呈负相关，与CE呈正相关，与CGN患者Cr、BUN呈正相关（P<0.05）。结论：NS、CGN患者外周血CD44表达水平超出正常范围，可能通过免疫机制参与NS、CGN的发生发展，同时，外周血CD44表达水平与患者肾功能存在一定相关性，对于辅助病情判断亦具有一定价值。
[关键词] 细胞粘附分子；CD44；肾病综合征；慢性肾小球肾炎
中图分类号：R692 文献标识码：A 文章编号：2095-5200（2016）06-094-03
DOI：10.11876/mimt201606035
肾病综合征（Nephrotic syndrome，NS）、慢性肾小球肾炎（Chronic glomerulonephritis，CGN）发病有多种因素参与，其中免疫损伤是二者发生过程中的共同环节 [1]。细胞免疫、体液免疫平衡失调是导致肾脏疾病发病并进展至终末期肾衰竭、影响患者生存质量的主要原因[2]。作为细胞粘附分子家族重要成员，CD44主要参与细胞与细胞、细胞与基质间特异性粘连过程，在肿瘤、器官移植排斥反应、自身免疫性疾病的发生发展中扮演着重要角色[3]。本研究就NS、CGN患者外周血CD44表达水平进行了检测与分析，探讨CD44在肾小球病变中作用机制。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2013年7月—2016年7月收治的57例NS患者、69例GGN患者及同期60名健康体检者，分别纳入NS组、GGN组及对照组。NS患者、GGN患者均经病史、体格检查、实验室检查或肾脏病理组织学检查，并参照改善全球肾脏病预后组织（KDIGO）慢性肾脏疾病诊疗指南（2012年版）确诊[4]，且入组前未接受相关治疗，排除合并感染、肝功能异常、其他免疫性疾病者，健康体检者血压、蛋白尿均处于正常范围内，既往无肾病史、严重感染史及免疫性疾病。各组受试者年龄、体质量指数（BMI）、性别等一般临床资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。本研究经我院医学伦理委员会批准，受试者均知情同意并签署书面协议。
1.2 研究方法
1.2.1 外周血CD44表达水平检测 于入组次日清晨抽取受试者空腹肘静脉抗凝血2 mL，使用淋巴分离液分离，以1×106/mL提取单个核细胞悬液，取细胞悬液100 μL，依次加入20 μL CD44-FITC（法国Immunotech公司）及阴性对照羊抗鼠IgG1-FITC（法国Immunotech公司），避光处理30 min后，使用Epics Altra 型流式细胞仪（美国Beckman Coulter公司）上机检测[5]。CD44表达水平计算方法[6]：CD44阳性细胞百分比=（待测标本内标记阳性细胞数/受检细胞总数）×100%-非特异结合细胞百分比。比较各组受试者外周血CD44表达水平的差异。
1.2.2 肾功能相关指标检测及相关性分析 于入组次日清晨抽取NS组、CGN组患者空腹肘静脉抗凝血2 mL，使用AU5800全自动生化分析仪（美国Beckman Coulter公司）对其血浆白蛋白（ALB）、胆固醇（CE）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）进行检测，运用Pearson法计算CD44表达水平与ALB、CE、Cr、BUN的相关性。
1.3 统计学分析
数据采用SPSS19.0进行分析，性别以（n/%）表示，并采用χ2检验，年龄、BMI、CD44表达水平等计量资料以（x±s）表示，相关性分析采用Pearson法，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 外周血CD44表达水平
CGN组患者外周血CD44表达水平高于NS组，NS组患者外周血CD44表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2 外周血CD44表达水平与肾功能相关指标相关性
Pearson相关分析显示，外周血CD44表达水平与NS患者ALB呈负相关，与CE呈正相关，与CGN患者Cr、BUN呈正相关（P<0.05）。见表2。
3 讨论
细胞粘附分子是一类来自不同基因的配体/受体分子，具有介导细胞信号转导、调节细胞增殖分化等作用，在近年来肾脏疾病的机制研究中得到了广泛关注[7-8]。
研究发现，CD44在人类和大鼠正常肾脏组织中几乎无表达，肾小囊上皮细胞、亨氏拌升支粗段小管上皮细胞以及远端小管上皮细胞可见少量表达，但在肾脏疾病中，CD44蛋白表达往往处于异常增高状态[9]。Fogo等[10]
发现，系膜增生性肾炎患者外周血CD44表达水平明显升高，且与系膜细胞活化增殖、肾小球内炎症细胞浸润具有密切关联；邹丽萍等[11]指出，CD44可促进机体炎症因子分泌，参与炎症反应。本研究就CD44在NS、CGN患者外周血内表达水平进行了检测，结果表明，NS、CGN患者外周血CD44表达水平均处于异常升高状态，考虑与CD44诱导淋巴细胞在肾组织内广泛浸润、活化炎症和产生炎性因子等作用有关[12]，说明CD44在NS、CGN发生发展过程中扮演了重要角色。 本研究相关性分析结果可见，CD44表达水平与NS患者ALB呈负相关，与CE呈正相关，其机制可能为：CD44具有调节细胞游走功能作用，可通过促进淋巴细胞在肾间质内广泛浸润，造成外周血淋巴细胞数量或功能异常、淋巴细胞亚群间比例失衡，而T淋巴细胞功能失调被认为是NS发病的重要机理之一[13-14]，而NS患者以高脂血症、低白蛋白血症为主要表现[15]，故随着NS患者外周血CD44表达水平的升高，其CE逐渐升高，ALB逐渐下降。
通过对CD44与CGN患者肾功能相关指标的分析，可以发现，CD44表达水平与患者Cr、BUN呈正相关，与ALB、CE无明显相关性，与CGN患者肾脏病理生理改变具有一致性：CGN患者肾小球滤过率的下降可导致肌酐清除率降低，继而导致体内Cr、BUN水平大幅上升，且其上升程度与患者病情具有密切关联[16]，而CD44可与透明质酸配体结合，上调细胞活素类物质、化学活素类物质表达，参与CGN细胞免疫病理过程，促进巨噬细胞向肾小球、肾小管间质浸润，导致病情进展[17]。此外，Maruyama等[18]发现，肾脏疾病患者尿液内CD44细胞密度亦呈现明显增高状态，说明CD44对系膜细胞及系膜基质的影响在NS、CGN发生发展过程中可能发挥了一定作用。
因此，可以认为，细胞粘附分子CD44在NS、CGN患者外周血表达水平均呈现异常增高状态，说明CD44在NS、CGN发病过程中扮演了重要角色，与此同时，CD44与患者肾功能相关指标具有显著相关性，亦可为患者病情判断提供一定参考。本研究为NS、CGN发病机制的深入了解及临床防治策略的制定提供了思路，但需要注意的是，由于目前临床对于肾脏疾病的确切发病机制尚无明确阐释，关于CD44对NS、CGN发生发展的具体机理仍有待更深层次的研究加以了解。
参 考 文 献
[1] Smeets B， Stucker F， Wetzels J， et al. Detection of activated parietal epithelial cells on the glomerular tuft distinguishes early focal segmental glomerulosclerosis from minimal change disease[J]. Am J Pathol， 2014， 184（12）： 3239-3248.
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[3] 王蔚， 樊均明， 陈辉珍. CD44对5/6肾切除大鼠残肾细胞增生和表型转化的影响[J]. 临床肾脏病杂志， 2005（1）：22-24.
[4] Lu M， Wang C， Yuan Y， et al. Differentially expressed microRNAs in kidney biopsies from various subtypes of nephrotic children[J]. Exp Mol Pathol， 2015， 99（3）： 590-595.
[5] 王莉. 细胞粘附分子CD44、CD62p在儿童原发性肾病综合征的表达及其相关性与临床意义的研究[D].济南：山东大学， 2003.
[6] Fogo A B， Cohen A H， Colvin R B， et al. Minimal change disease and focal segmental glomerulosclerosis[M]//Fundamentals of Renal Pathology. Springer Berlin Heidelberg， 2014： 45-58.
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[8] Hamatani H， Hiromura K， Sakairi T， et al. Expression of a novel stress-inducible protein， sestrin 2， in rat glomerular parietal epithelial cells[J]. Am J Physiol Renal Physiol， 2014， 307（6）： F708-F717.
[9] 肖敬川. 肾病综合征、慢性肾小球肾炎和2-糖尿肾病抗碳酸酐酶抗体、CD44和CRP的测定[D]. 武汉：中南大学， 2007.
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[12] Tokgoz H， Caliskan U， Keles S， et al. Variable presentation of primary immune deficiency： two cases with CD3 gamma deficiency presenting with only autoimmunity[J]. Pediatr Allergy Immunol， 2013， 24（3）： 257-262. [13] Rampanelli E， Rouschop K M A， Claessen N， et al. Opposite role of CD44-standard and CD44-variant-3 in tubular injury and development of renal fibrosis during chronic obstructive nephropathy[J]. Kidney Int， 2014， 86（3）： 558-569.
[14] 都兴华， 苏泽轩， 丁泓文， 等. CD44在大鼠肾缺血再灌注损伤中的表达及意义[J]. 中华实验外科杂志， 2015， 32（6）： 1259-1260.
[15] Rampanelli E， Rouschop K， Teske G J D， et al. CD44v3-v10 reduces the profibrotic effects of TGF-β1 and attenuates tubular injury in the early stage of chronic obstructive nephropathy[J]. Am J Physiol Renal Physiol， 2013， 305（10）： F1445-F1454.
[16] Ramani K， Pawaria S， Maers K， et al. An essential role of interleukin-17 receptor signaling in the development of autoimmune glomerulonephritis[J]. J Leukoc Biol， 2014， 96（3）： 463-472.
[17] Peng Y， Ke M， Xu L， et al. Donor-derived mesenchymal stem cells combined with low-dose tacrolimus prevent acute rejection after renal transplantation： a clinical pilot study[J]. Transplantation， 2013， 95（1）： 161-168.
[18] Maruyama T， Fukuda N， Matsumoto T， et al. Systematic implantation of dedifferentiated fat cells ameliorated monoclonal antibody 1-22-3-induced glomerulonephritis by immunosuppression with increases in TNF-stimulated gene 6[J]. Stem Cell Res Ther， 2015， 6（1）： 1.
[关键词] 细胞粘附分子；CD44；肾病综合征；慢性肾小球肾炎
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1 资料与方法
1.1 一般资料
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1.2 研究方法
1.2.1 外周血CD44表达水平检测 于入组次日清晨抽取受试者空腹肘静脉抗凝血2 mL，使用淋巴分离液分离，以1×106/mL提取单个核细胞悬液，取细胞悬液100 μL，依次加入20 μL CD44-FITC（法国Immunotech公司）及阴性对照羊抗鼠IgG1-FITC（法国Immunotech公司），避光处理30 min后，使用Epics Altra 型流式细胞仪（美国Beckman Coulter公司）上机检测[5]。CD44表达水平计算方法[6]：CD44阳性细胞百分比=（待测标本内标记阳性细胞数/受检细胞总数）×100%-非特异结合细胞百分比。比较各组受试者外周血CD44表达水平的差异。
1.2.2 肾功能相关指标检测及相关性分析 于入组次日清晨抽取NS组、CGN组患者空腹肘静脉抗凝血2 mL，使用AU5800全自动生化分析仪（美国Beckman Coulter公司）对其血浆白蛋白（ALB）、胆固醇（CE）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）进行检测，运用Pearson法计算CD44表达水平与ALB、CE、Cr、BUN的相关性。
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2 结果
2.1 外周血CD44表达水平
CGN组患者外周血CD44表达水平高于NS组，NS组患者外周血CD44表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2 外周血CD44表达水平与肾功能相关指标相关性
Pearson相关分析显示，外周血CD44表达水平与NS患者ALB呈负相关，与CE呈正相关，与CGN患者Cr、BUN呈正相关（P<0.05）。见表2。
3 讨论
细胞粘附分子是一类来自不同基因的配体/受体分子，具有介导细胞信号转导、调节细胞增殖分化等作用，在近年来肾脏疾病的机制研究中得到了广泛关注[7-8]。
研究发现，CD44在人类和大鼠正常肾脏组织中几乎无表达，肾小囊上皮细胞、亨氏拌升支粗段小管上皮细胞以及远端小管上皮细胞可见少量表达，但在肾脏疾病中，CD44蛋白表达往往处于异常增高状态[9]。Fogo等[10]
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通过对CD44与CGN患者肾功能相关指标的分析，可以发现，CD44表达水平与患者Cr、BUN呈正相关，与ALB、CE无明显相关性，与CGN患者肾脏病理生理改变具有一致性：CGN患者肾小球滤过率的下降可导致肌酐清除率降低，继而导致体内Cr、BUN水平大幅上升，且其上升程度与患者病情具有密切关联[16]，而CD44可与透明质酸配体结合，上调细胞活素类物质、化学活素类物质表达，参与CGN细胞免疫病理过程，促进巨噬细胞向肾小球、肾小管间质浸润，导致病情进展[17]。此外，Maruyama等[18]发现，肾脏疾病患者尿液内CD44细胞密度亦呈现明显增高状态，说明CD44对系膜细胞及系膜基质的影响在NS、CGN发生发展过程中可能发挥了一定作用。
因此，可以认为，细胞粘附分子CD44在NS、CGN患者外周血表达水平均呈现异常增高状态，说明CD44在NS、CGN发病过程中扮演了重要角色，与此同时，CD44与患者肾功能相关指标具有显著相关性，亦可为患者病情判断提供一定参考。本研究为NS、CGN发病机制的深入了解及临床防治策略的制定提供了思路，但需要注意的是，由于目前临床对于肾脏疾病的确切发病机制尚无明确阐释，关于CD44对NS、CGN发生发展的具体机理仍有待更深层次的研究加以了解。
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