PCV2 LAMP现场可视化定性和荧光定量PCR快速检测试剂盒

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  2017年3月22日,上海市政府在上海展览中心隆重举办了上海市科学技术奖励大会,上海市农业科学院生物技术研究所赵凯研究员主持的《断奶仔猪多系统衰竭综合征防控新技术的建立及应用》项目荣获2016年上海市科技进步三等奖。
  1 项目所属科学技术领域
  屬于农业生物技术领域。
  2 主要技术内容
  2.1 猪断奶后多系统衰竭综合征
  断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)是由猪圆环病毒2型(PCV2)引起的一种重要疾病,严重发病地区死淘率达40%以上。由于PCV2严重破坏猪的免疫系统,使各种疫苗免疫失败。因此,PCV2感染的早期诊断和病猪的淘汰成为PMWS防治的重点。
  2.2 PMWS防控新策略和支撑技术的建立
  有鉴于此,申请人提出了PMWS防控新 策略:
  (1)首先养殖户用PCV2 LAMP试剂盒定性检测猪群,将被PCV2感染的猪与健康猪隔离开来,防止交叉感染。
  (2)用定量PCR试剂盒对被PCV2感染的猪进行定量检测,文献报道猪体内PCV2病毒超过4 000拷贝/mL血液就会患病,而患病猪很难康复,因此,建议将PCV2病毒超过4 000拷贝/mL血液的猪直接淘汰。
  (3)母猪会将PCV2传播给仔猪,公猪会将PCV2传播给母猪,因此养殖户用PCV2 LAMP试剂盒定性检测种猪,将被PCV2感染的种猪直接淘汰。因此,通过以上两种方法组合起来进行检测、隔离和对病猪的适当淘汰可以防控PMWS,最大限度减少养殖户经济损失。
  为此我们建立了PCV2 LAMP现场可视化定性和荧光定量PCR快速检测支撑技术并成功开发出试剂盒。将两种试剂盒组合起来防控PMWS,最大限度减少养殖户经济损失。
  3 成果科技创新程度
  (1)PCV2 LAMP现场可视化快速定性检测试剂盒:
  a 设计的PCV2 LAMP引物序列未见报道;
  b 增加了一对环引物,可使LAMP反应时间减少一半,这是前人工作所没有的;
  c 在LAMP反应体系中添加了甜菜碱,加速了解链速度,这是前人工作所没有的;
  d 首创了不提取PCV2病毒核酸、直接以猪血清样本为模板加入反应体系进行LAMP反应,减少了操作时间和步骤,降低成本。
  (2)PCV2荧光定量PCR定量检测试剂盒:
  a 设计的荧光定量PCR引物和探针序列未见报道;
  b 创造和优化了PCV2荧光定量PCR反应体系和参数,效果大大优于前人的报道;
  c 该方法被美国佐治亚疾控中心所采用。
  (3)首次提出了将基于LAMP现场可视化快速定性检测方法和荧光定量PCR定量检测方法组合起来进行猪PCV2定性、定量检测以防控PMWS的检测策略和技术。
  (4)检测灵敏度达到进出口畜产品检测国际标准。无论在技术水平,还是试剂盒的灵敏度上,均高于国内外同类研究。
  4 知识产权及应用推广情况
  申请专利3项,获授权国家发明专利1项,提出PMWS防控新策略一种,开发试剂盒2种。
  在江、浙、沪、皖、鲁、豫养猪场将这一新策略和技术进行了示范推广,用于PMWS防控。使PMWS发病率大大降低。由于利用此技术减少了药物和饲料及人工成本,每头猪节约30元。累积节约10.5亿元养殖投入。采用此技术全国每年将节约180亿元的养殖成本。
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