【摘 要】
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目的克隆大鼠白细胞介素-10(IL-10)cDNA的全长序列,为其分子生物学利用奠定基础.方法无菌条件下切取大鼠的脾脏,收集脾细胞,用脂多糖(LPS)刺激培养4 h;离心得到一定量细胞,加
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目的克隆大鼠白细胞介素-10(IL-10)cDNA的全长序列,为其分子生物学利用奠定基础.方法无菌条件下切取大鼠的脾脏,收集脾细胞,用脂多糖(LPS)刺激培养4 h;离心得到一定量细胞,加入变性液,一步法提取细胞总RNA;逆转录合成IL-10的第1条链,用自己设计的特异性上下游引物进行PCR扩增,得到期望相对分子质量的PCR产物;酶切后插入pcDNA3载体,转染感受态细胞进行筛选制备,并行PCR、酶切鉴定和测序.结果脾细胞经LPS刺激后IL-10转录水平增加,从提取的RNA转录产物中容易扩增出期望相对分子
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