【摘 要】
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目的 探讨联合转移人α1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)和衰变加速因子(DAF)基因对模拟异种移植超急性排斥反应的抑制作用.方法 通过显微注射制备转人HT及DAF基因的子代小鼠,以聚合酶
【机 构】
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郑州大学第一附属医院泌尿外科,天津市泌尿外科研究所,中国科学院遗传与发育生物学研究所
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目的 探讨联合转移人α1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)和衰变加速因子(DAF)基因对模拟异种移植超急性排斥反应的抑制作用.方法 通过显微注射制备转人HT及DAF基因的子代小鼠,以聚合酶链反应和流式细胞仪筛选出人HT和(或)DAF基因整合与表达阳性的子代转基因小鼠.以同时表达人HT和DAF基因的小鼠为实验组,单一表达人HT或DAF基因的小鼠为HT对照组和DAF对照组,取其心脏,采用改良的Langendorff心脏灌注装置灌注心脏,先以KH液逆向灌注,30 min后再以含15%(体积分数)人AB血清的Krebs-Henseleit液(KH液)灌注.记录不同灌注时间的心率、左心室收缩压及左心室舒张末压,计算左心室获得压,以心率与左心室获得压的乘积作为心脏左心室收缩功能的指标,免疫组化法观察灌注后的心脏血管内皮细胞和组织中IgM与C3c的沉积情况.结果 KH液灌注过程中,各组间心脏做功能力的差异无统计学意义;KH液中加入人血清后,HT对照组和DAF对照组的心脏做功能力明显下降,在灌注60 min时心脏做功分别为最大值的27%和23%,平均做功时间分别为118 min和89 min,普通小鼠心脏在灌注后50 min时停止搏动,而实验组的心脏做功能力下降缓慢,至60 min时心脏做功维持在最大值的67%以上,平均做功时间为225 min,其心脏做功能力与搏动时间高于HT对照组和DAF对照组(P＜0.05).免疫组化染色显示,实验组小鼠心脏血管内皮细胞与组织中未见IgM和C3c沉积,HT对照组可见C3c少量沉积,DAF对照组可见IgM沉积和C3c少量沉积,普通小鼠心脏可见IgM和C3c沉积.结论 小鼠联合转移人HT和DAF基因后,其心脏在人血清灌注下的免疫损伤明显减轻,这可能对抵御异种移植超急性排斥反应有一定帮助.
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