【摘 要】
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目的 制备血友病A的治疗基因 ,从invivo途径观察人凝血因子Ⅷ (hFⅧ )在动物体内的表达。方法 将B区缺失 (76 0～ 16 39位氨基酸 )的hFⅧcDNA克隆至真核细胞表达载体pRC/RSV
【机 构】
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上海第二医科大学瑞金医院、上海血液学研究所; 上海第二医科大学瑞金医院、上海;
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目的 制备血友病A的治疗基因 ,从invivo途径观察人凝血因子Ⅷ (hFⅧ )在动物体内的表达。方法 将B区缺失 (76 0～ 16 39位氨基酸 )的hFⅧcDNA克隆至真核细胞表达载体pRC/RSV ,与转染试剂DOTAP Cholesterolliposome混合 ,制备治疗基因pRC/RSV hFⅧBD DOTAP Cholesterol。肌肉注射给BALB/c小鼠后 ,在第 2 ,10 ,2 0 ,30 ,40 ,5 0天取小鼠的血液以及心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌等组织。检测血浆中的hFⅧ抗原和抗体 ,用PCR和RT PCR方法检测hFⅧBDcDNA在小鼠各组织基因组中的分布及其转录情况 ,免疫组织化学染色检测各组织中hFⅧ的表达。结果 在注射结束后的第 48小时 ,小鼠血浆和组织中即有hFⅧ的表达 ,第 10天血浆中的hFⅧ抗原水平最高 ,达 17.5 5ng/ml,以后逐渐下降。血浆中的hFⅧ抗体在注射结束后的第 10天出现 ,以后缓慢升高 ,第 5 0天时达 37.0 6U/ml。PCR、RT PCR检测和免疫组织化学染色显示小鼠各组织中均有hFⅧBDcDNA的存在、转录和表达 ,但随着时间推移逐渐减少。脾、肺、肾脏中hFⅧBDcDNA的转录和表达时间均长于心脏、肝脏和骨骼肌。结论 由pRC/RSV hFⅧBD与DOTAP Cholesterolliposome结合而制备的治疗基因pRC/RSV hFⅧBD DOTAP Cholesterol能够通过invivo途径在动物体内很好地表达hFⅧ ,这为?
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