【摘 要】
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目的：研究靶向HBV X（ HBx）基因的长发夹RNA （ lhRNA）表达载体对HBV基因复制和表达的影响。方法以HBx为靶点，合成四条小干扰RNA（ siRNA）寡核苷酸并构建lhRNA表达载体。 siRNA寡核苷酸
【机 构】
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江苏省淮安市第四人民医院肝病研究所,江苏省徐州市儿童医院六病区
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目的：研究靶向HBV X（ HBx）基因的长发夹RNA （ lhRNA）表达载体对HBV基因复制和表达的影响。方法以HBx为靶点，合成四条小干扰RNA（ siRNA）寡核苷酸并构建lhRNA表达载体。 siRNA寡核苷酸序列（4个转染组）或长发夹 RNA （ lhRNA ）表达载体（2个转染组）转染HepG2．2．15细胞后，通过时间分辨免疫荧光法、荧光定量PCR及反转录PCR分别检测细胞培养上清液中的乙型肝炎病毒表面抗原（ HBsAg）、HBV DNA及细胞内的HBx mRNA水平。以转染阴性序列或空载体为阴性对照组。采用独立样本t检验评估siRNA对HBV基因复制和表达的抑制效果。结果与阴性对照组相比， siRNA-1及 siRNA-4组以较高浓度（60 nmol／L 或90 nmol／L ）转染入HepG2．2．15细胞后，培养上清液中的HBsAg、HBV DNA及HBx mRNA水平均显著降低（P＜0．05），其中，siRNA-1组在转染后不同时间点（24，48，72 h）细胞培养上清液中的HBsAg和HBV DNA载量均较对照组显著降低（ P＜0．05或P＜0．01）。构建成功两个lhRNA表达载体：pMD-HBxlh1和pMD-HBxlh4，其转染入细胞后，培养上清液中的 HBsAg 及 HBV DNA 水平显著低于阴性对照组（ P ＜0.05）。结论新证实一个HBx基因的有效干扰靶点即 siRNA-1。靶向HBx的lhRNA 表达载体pMD-HBxlh1和pMD-HBxlh4可有效抑制HBV基因的复制和表达。
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