【摘 要】
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本研究从SPF鸡皮肤中提取总RNA,并反转录为cDNA;以该cDNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增出看家基因β-actin和GAPDH,将PCR产物连入pGEM-T easy载体,转化DH5α菌,经
【机 构】
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扬州大学兽医学院江苏省动物预防医学重点实验室
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本研究从SPF鸡皮肤中提取总RNA,并反转录为cDNA;以该cDNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增出看家基因β-actin和GAPDH,将PCR产物连入pGEM-T easy载体,转化DH5α菌,经蓝白斑筛选和质粒酶切鉴定和DNA含量测定,得到定量的β-actin和GAPDH基因融合的重组质粒(pGEM T-actin和pGEM T-GAPDH),即实时定量PCR内参标准品.构建成功的标准品经10倍梯度稀释,作为模板,获得扩增效率良好及可信度高的标准曲线.构建成功的标准品可大量制备,可用于鸡的靶基因定量PCR所需的内参标准品.
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