【摘 要】
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建立体外合成mRNA高效转染人胚胎干细胞(hESCs)的方法,为高效基因转染hESCs提供一种新选择.体外合成绿色荧光蛋白mRNA(eGFP mRNA)通过脂质体和电转的方法转染hESCs,流式检测
【机 构】
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湖北医药学院附属太和医院 胚胎干细胞研究湖北省重点实验室,湖北十堰,442000
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建立体外合成mRNA高效转染人胚胎干细胞(hESCs)的方法,为高效基因转染hESCs提供一种新选择.体外合成绿色荧光蛋白mRNA(eGFP mRNA)通过脂质体和电转的方法转染hESCs,流式检测阳性率,台盼蓝染色检测细胞存活率.HN4人胚胎干细胞中转染不同剂量的eGFP mRNA和eGFP质粒,流式检测阳性率和荧光强度.将eGFP mRNA转染HN4和iPS细胞系,流式检测其转染效率.免疫荧光检测电转eGFP mRNA对HN4细胞干性的影响.体外合成红色荧光蛋白(DsRed mRNA)和eGFP mRNA共转HN4细胞荧光显微镜观察共转效果.体外合成eGFP mRNA可通过电转的方式高效进入HN4细胞中,并且电转后细胞状态良好,细胞存活率为94.6％ ±0.67％,在hESCs和iPS细胞系中转染效率均达到99％以上.HN4细胞中电转低剂量的eGFP mRNA即可高效进入细胞并持续高效表达4d.电转eGFP mRNA的HN4细胞可保持良好的干细胞特性,并且多种体外合成mRNA可高效共转hESCs.体外合成mRNA可通过电转的方式高效转入hESCs中,体外合成mRNA技术为hESCs高效基因转染提供了一个新思路.
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