【摘 要】
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目的利用Lgr5-EGFP-Cre ERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠建立谱系追踪方法,用于观察Lgr5+小肠干细胞在小肠组织更新中的作用,并研究辐射对小肠干细胞组织重建的影响。方法通过基因
【机 构】
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广西医科大学研究生院; 军事医学科学院放射与辐射医学研究所;
【基金项目】
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国家重大新药创制专项课题(2013ZX09J13102-02C);国家自然科学基金面上项目(81272997)~~
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目的利用Lgr5-EGFP-Cre ERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠建立谱系追踪方法,用于观察Lgr5+小肠干细胞在小肠组织更新中的作用,并研究辐射对小肠干细胞组织重建的影响。方法通过基因型分析鉴定Lgr5-EGFP-Cre ERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠。他莫西芬诱导小鼠体内的荧光蛋白表达,激光共聚焦显微镜观察诱导后小肠干细胞的分化。采用60Coγ射线(15Gy)照射Lgr5-EGFP-Cre ERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠,观察辐射对小肠干细胞组织重建的影响。结果提取鼠尾DNA通过PCR方法鉴定Lgr5基因(174bp),获得双阳性小鼠。他莫西芬(100mg/kg)单次诱导后,激光共聚焦观察到Lgr5+小肠干细胞在诱导后5d开始分裂,7d已到达绒毛顶端,14d少量绒毛全部带有荧光,45d更多的小肠绒毛中存在荧光细胞,而且更加稠密。但在15Gy照射后小鼠小肠绒毛脱落严重,隐窝处没有荧光出现。结论成功建立了小肠干细胞谱系追踪模型,并初步观察了辐射对小肠干细胞损伤的影响。
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