醋酸甲羟孕酮(MPA)人工抗原的合成与单克隆抗体的制备

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为研制检测醋酸甲羟孕酮(MPA)的免疫学检测技术进行MPA单克隆抗体的制备与鉴定,研究分别采用碳二亚胺法、混合酸酐法将MPA偶联到牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)上制备免疫原(MPA-BSA)与包被原(MPA-OVA),通过BALB/c小鼠免疫、细胞融合、间接ELISA和阻断ELISA筛选、有限稀释法克隆亚克隆获得分泌MPA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过ELISA方法对其抗体效价、特异性、敏感性、亚类及稳定性进行鉴定。结果表明:成功合成2种人工抗原,MPA与BSA、OVA的偶联比分别为8:1、12:1;获得1株稳定分泌MPA单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株2G4H9,McAb腹水的间接ELISA效价为1:8×104,IgG1亚类,κ型轻链,腹水抗体IC50为5.0 ng·mL-1,与甲地孕酮、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和己烯雌酚交叉反应率为12.5%、<0.01%、<0.01%和<0.01%。作者认为:MPA单克隆抗体特异性和敏感性良好,杂交瘤细胞株性能稳定,为进一步研究MPA相关免疫学分析技术奠定了基础。
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