【摘 要】
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旨在编辑PFF细胞的P53基因,并分析其信号通路中重要基因的表达。本研究首先将设计好的两条sgRNAs装载入PX459 V2.0质粒中,订购两条携带241W、242S、266H突变位点的单链寡核苷
【机 构】
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江西农业大学省部共建猪遗传改良与养殖技术国家重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金(31771372);国家科技重大专项(2016ZX08006-003)
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旨在编辑PFF细胞的P53基因,并分析其信号通路中重要基因的表达。本研究首先将设计好的两条sgRNAs装载入PX459 V2.0质粒中,订购两条携带241W、242S、266H突变位点的单链寡核苷酸(SSODN)作为供体DNA(一条带有前两个突变,另一条带有266H突变),利用电转法将打靶载体和SSODNs共转染到PFF细胞中,筛选单克隆细胞后检测打靶区域的编辑情况,并检测编辑细胞中信号通路重要基因(MDM2、FAS、WIP1、BAX、P21和DD1α)的表达及检测编辑细胞的增殖能力。结果表明,在筛选到的
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