论文部分内容阅读
【摘 要】 目的：观察壮药青风藤总生物碱对类风湿关节炎模型大鼠的治疗疗效以及对模型大鼠血清PDGF、PAF表达的影响。方法：选用40只SD大鼠，随机分为空白组、模型组、青风藤总生物碱低、中、高剂量组五组。除空白组外，其余组均采用Ⅱ型胶原酶诱导关节炎大鼠，造模后进行关节炎评分和体重记录。给药4周后处死，取血清，采用ELISA法检测血清中PDGF、PAF的表达。结果：造模后，大鼠关节肿胀明显，血清中PDGF、PAF表达显著增加。给药后，大鼠关节肿胀明显好转，血清中PDGF、PAF表达较模型组低。结论：壮药青风藤总生物碱能有效减轻类风湿关节炎症状，并能抑制血清中PDGF、PAF表达。
【关键词】 壮药青风藤;类风湿关节炎;血小板生长因子;血小板活化因子
【中图分类号】R29 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）20-0016-03
The Effect of Total Alkaloids of Sinomenine on the Expression of PDGF and PAF in Rheumatoid Arthritis Rats
CAO Zhiyong ZHANG Qinghuai PANG Yuzhou*
Guangxi Zhuang Yao Medicine Center of Engineering and Technology， Guangxi University of
Chinese Medicine， Nanning 530200， China
Abstract：Objective To observe the therapeutic effect of total alkaloids of sinomenia on rheumatoid arthritis model rats and the effect on the expression of serum PDGF and PAF.Methods 40 SD rats were randomly divided into five groups： blank group， model group， low， medium and high dose group. Except for the blank group. The other groups were induced by type II collagenase. Arthritis score and body weight were recorded. After 4 weeks of administration， the serum was taken and the expression of PDGF and PAF were detected by ELISA.Results After the establishment of the model， the joint swelling was obvious， and the expression of PDGF and PAF in serum increased significantly. After administration， the joint swelling of rats was improved obviously， and the expression of PDGF and PAF in serum was lower than that of model group.Conclusion the total alkaloids of sinomenia can effectively alleviate the symptoms of rheumatoid arthritis. It can also inhibit the expression of PDGF and PAF in serum.
Keywords：Caulis Sinomenii; Rheumatoid Arthritis; Platelet Growth Factor; Platelet Activating Factor
類风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一种类风湿因子侵犯滑膜、关节的慢性免疫性疾病，最明显的病理反应是对机体关节和骨质的破坏。同时，它也能引起全身性的并发症，如肺炎、泌尿系感染、口腔溃疡等。然而由于对于类风湿关节炎的病机病因认识并不彻底，导致类风湿关节炎的治疗，差异性较大。目前行之有效的治疗RA的药物分为4大类：NSAIDs、DMARDs、糖皮质激素及植物药制剂[1]，可是都易形成耐药性。类风湿关节炎的发病过程常常伴随着血细胞的变化，尤其以血小板的活化最为相关。血小板生长因子（PDGF）和血小板活化因子（PAF）作为血小板活化后的产物，是RA过程中血小板活化的标准性指标[2]。青风藤是防己科植物青藤（Sinomenium acuturn）及毛青藤（Sinamenium acutum）的干燥藤茎，是壮药龙钻通痹方的主要组成药物，能通“龙路”“火路”，临床上多用于治疗类风湿关节炎，且疗效显著。青藤碱是壮药青风藤的主要化合物，具有抗炎、抑制移植物排斥、抗肿瘤以及抑制免疫等药理作用[3]。但对RA患者的血小板的影响机制还不明确。本实验就此现状，望探究出青藤碱在治疗类风湿关节炎的过程中对血小板因子PDGF、PAF表达的影响。
1 材料
1.1 实验动物 SPF级健康（SD）大鼠40只，8～10周龄，雄性，体质量（180±20）g（湖南斯莱克景达，SCXK（湘）2016-002），适应性喂养5天后开始实验。 1.2 材料 青风藤干燥藤茎（购于广西中医药大学第一附属医院，经韦松基鉴定为防己科植物青藤藤茎Sinomenium acuturn）;天然牛Ⅱ型胶原蛋白、完全弗氏佐剂、P-选择素检测试剂盒、PECAM-1检测测试盒购自与南宁市鹏碧实验室器材经营部。
2 方法
2.1 分组与造模 将40只SD大鼠随机分为空白组8只以及造模组32只，将溶于醋酸的牛Ⅱ型胶原蛋白先于4 ℃低温保存过夜，第2 d与完全弗氏佐剂以等体积乳化，乳化成功后，对模型组大鼠背部及尾部多点行皮下注射，诱导类风湿关节炎模型;空白对照组大鼠注射等量0.9%氯化钠溶液[4]。
2.2 造模评分 按照关节指数评分标准对类风湿关节炎模型大鼠进行评分，首次注射后每3 d称重1次，每周固定两名实验员记录关节肿胀评分。
2.3 给药 造模后第21 d进行关节评分，评分>4分即认定为造模成功。成模大鼠随机分为模型组n=8）和青藤碱低剂量组、青藤碱中剂量组、青藤碱高剂量组。分组后开始给药：青藤碱组灌胃给予青藤碱的混悬液，低剂量组给药青藤碱5 mg/kg/d;中剂量组给与10 mg/kg/d;高剂量组给药20 mg/kg/d。模型组与对照组灌胃等量0.9%氯化钠溶液;灌胃剂量按照10 mL/kg/d，每天1次，持续28 d。
2.4 实验取材 造模成功后，行第一次眼眶取血，离心保存血清。第二轮取血于实验结束后;此次取血先禁食一夜，次日于大鼠眼眶取血。ELISA法测定血清中PDGF、PAF水平，操作方法严格按试剂盒说明书操作。
3 结果
3.1 各组大鼠足关节指数的变化 造模后，大鼠多关节肿胀明显，并伴有明显红肿;给药后，大鼠关节明显好转。给药第7、14、21 d时，壮药青藤碱高剂量组足关节指数评分明显低于模型组P<0.05），第28 d显著低于模型组P<0.01）;给药第7、14、21、28 d，壮药青藤碱中剂量组关节指数明显下降，关节肿胀改善情况优于模型组P<0.05）;给药第14、21、28 d，壮药青藤碱低剂量组关节指数下降，关节肿胀改善情况优于模型组P<0.05）。见表1。
3.2 各组大鼠血清PDGF、PAF的表达情况 给药后，壮药青藤碱高剂量组和空白组大鼠血清PDGF、PAF的表达显著下降，且低于模型组P<0.01）;壮药青藤碱中、低剂量组大鼠血清PDGF、PAF的表达明显下降，且低于模型组P<0.05）。见表2。
4 讨论
RA在我国的发病率仅约为0.35%，但由于我国人口基数大，患病总人数超500万，严重影响人民身心健康，甚至在某些地区，患者中存在很高的抑郁率，给患者家庭和社会带来了巨大负担。类风湿关节炎的发病和多种炎症因子相关，如肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、IL-4[5]、IL-6、IL-17[6]、IL-10、IL-1[7]、IL-1β[8]等。董文哲等[9]研究发现，血细胞血小板的计数变化和RA的关系尤为密切，血小板的激活和类风湿关节炎的炎症反应呈正相关;而血小板的激活必然会分泌PDGF和PAF，导致PDGF和PAF在类风湿关节炎炎性反应中呈现高表达[10]。
壮医认为，RA属于壮医“发旺”（壮名：Fungcaep）范畴。该病的主要发病机理为风、寒、湿、热等毒邪乘虚侵入人体，阻滞“龙路” “火路”，使气血运行不畅，痹阻于筋骨肌肉、关节所致;治疗当祛风除湿，行气消肿止痛。壮药龙钻通痹方是壮医治疗活动期RA的经验方，该方遵循壮医主帮配伍的组方原则。由飞龙掌血、大钻、八角枫、两面针、青风藤、九龙藤等组成，能疏通“龙路”“火路”之瘀滞，直接祛邪外出，恢复天、人、地三气的同步运行，从而达到治疗目的。
青藤碱是壮药青风藤治疗类风湿关节炎主要有效的化学成分，现代临床及实验发现，青藤碱治疗类风湿关节炎的临床效果显著，对类风湿发病过程中的各种炎性因子都有一定的影响。如能降低细胞因子IL-1、IL-6[14]、IL-1、IL-17[15]、TNF-α等的表达;还能上调IL-4[16]的表达，从而减轻类风湿关节炎的滑膜增生和骨破坏。但是对类风湿关节炎发病过程中血小板的影响情况却研究不多。
本实验发现，青藤碱对类风湿关节炎模型大鼠的血小板因子PDGF和PAF有抑制作用，并能有效缓解大鼠关节肿胀，达到治疗类风湿关节炎的效果。但在药物浓度上有一定的要求。
参考文献
[1]杨爽，彭兰驭，牟茂婷，等.类风湿关节炎的治疗进展[J].世界最新医学信息文摘，2018，18（A2）：115-116.
[2]錢鑫，赵智明，张蓓蓓，等.青藤碱对类风湿关节炎患者炎性细胞因子及免疫系统的影响[J].中药材，2018，41（5）：1226-1228.
[3]秦峰， 蔡辉.青藤碱药理作用研究进展[J].现代中药研究与实践， 2016， 30 （4） ：81-86.
[4]刘佳维，李艳彦，王永辉.类风湿关节炎的实验动物模型研究进展[J].世界最新医学信息文摘，2016，16（64）：35-36.
[5]刘金星，胡琼，丁宁，等.针刺对类风湿性关节炎小鼠血清IL-4和TNF-α的影响[J].亚太传统医药，2019，15（3）：11-13.
[6]曹艳玲.关于IL-6、IL-17、IL-10与类风湿关节炎活动的相关性分析[J].世界最新医学信息文摘，2018，18（3）：1134.
[7]何奕坤，杨光辉，吕明慧，等.补肾解毒通络方联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎患者血清中IL-1、IL-6、TNF-α的影响[J].辽宁中医杂志，2015，42（8）：1451-1453.
[8]栾仲秋，李秋红，王继坤，等.类风湿性关节炎患者IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23和 IL-33炎性相关因子变化的临床意义[J].解放军预防医学杂志，2019，37（3）：64-65.
[9]董文哲，刘健，忻凌，等.基于数据挖掘的老年类风湿关节炎患者血小板参数变化及关联规则分析[J].中国临床保健杂志，2020，23（1）：52-56.
[10]杨秀丽，黄传兵，贾建云，等.血小板微粒的释放与类风湿关节炎的相关性研究现状[J].风湿病与关节炎，2015，4（6）：61-64.
[11]罗宇东，吴玉强，陈洪涛，等.治疗类风湿关节炎壮药龙钻通痹方的研究进展[J].大众科技，2019，21（6）：76-79.
[12]孙慧慧.壮药龙钻通痹方治疗类风湿关节炎多药耐药的疗效评估[J].壮瑶药研究，2019（1）：72-76.
[13]田照，庞宇舟，袁德培，等.壮药龙钻通痹方影响类风湿关节炎大鼠成骨细胞转录因子Smad5的时序性分析[J].中国老年学杂志，2019，39（21）：5307-5311.
[14]赵静，刘伟伟，李雪萍，等.青藤碱对佐剂诱导性关节炎模型大鼠炎症相关因子表达的影响[J].重庆医学，2018，47（7）：879-882.
[15]周彬，周迎莉，林为民，等.青藤碱联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎患者IL-1，IL-17和TNF-α表达的影响[J].现代中西医结合杂志，2014，23（19）：2066-2068.
[16]高晨鑫，张湛明，陈继红，等.青藤碱对类风湿关节炎细胞因子影响的研究进展[J].风湿病与关节炎，2017，6（2）：72-75.
（收稿日期：2020-06-09 编辑：程鹏飞）
基金项目：国家自然科学基金资助项目（编号：81973976）;壮瑶药协同创新中心（桂教科研〔2013〕20号）;广西一流学科建设项目（编号：桂教科研[2018]12）。
作者简介：曹知勇（1994-），男，土家族，硕士研究生在读，研究方向为民族医药、中医疑难杂病。E-mail：caozhiyong2019@163.com
通信作者：庞宇舟（1963-），男，汉族，硕士，教授，博士研究生导师，研究方向为民族医药、中医内科。E-mail：2017yuzhoupang@sina.com
【关键词】 壮药青风藤;类风湿关节炎;血小板生长因子;血小板活化因子
【中图分类号】R29 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）20-0016-03
The Effect of Total Alkaloids of Sinomenine on the Expression of PDGF and PAF in Rheumatoid Arthritis Rats
CAO Zhiyong ZHANG Qinghuai PANG Yuzhou*
Guangxi Zhuang Yao Medicine Center of Engineering and Technology， Guangxi University of
Chinese Medicine， Nanning 530200， China
Abstract：Objective To observe the therapeutic effect of total alkaloids of sinomenia on rheumatoid arthritis model rats and the effect on the expression of serum PDGF and PAF.Methods 40 SD rats were randomly divided into five groups： blank group， model group， low， medium and high dose group. Except for the blank group. The other groups were induced by type II collagenase. Arthritis score and body weight were recorded. After 4 weeks of administration， the serum was taken and the expression of PDGF and PAF were detected by ELISA.Results After the establishment of the model， the joint swelling was obvious， and the expression of PDGF and PAF in serum increased significantly. After administration， the joint swelling of rats was improved obviously， and the expression of PDGF and PAF in serum was lower than that of model group.Conclusion the total alkaloids of sinomenia can effectively alleviate the symptoms of rheumatoid arthritis. It can also inhibit the expression of PDGF and PAF in serum.
Keywords：Caulis Sinomenii; Rheumatoid Arthritis; Platelet Growth Factor; Platelet Activating Factor
類风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一种类风湿因子侵犯滑膜、关节的慢性免疫性疾病，最明显的病理反应是对机体关节和骨质的破坏。同时，它也能引起全身性的并发症，如肺炎、泌尿系感染、口腔溃疡等。然而由于对于类风湿关节炎的病机病因认识并不彻底，导致类风湿关节炎的治疗，差异性较大。目前行之有效的治疗RA的药物分为4大类：NSAIDs、DMARDs、糖皮质激素及植物药制剂[1]，可是都易形成耐药性。类风湿关节炎的发病过程常常伴随着血细胞的变化，尤其以血小板的活化最为相关。血小板生长因子（PDGF）和血小板活化因子（PAF）作为血小板活化后的产物，是RA过程中血小板活化的标准性指标[2]。青风藤是防己科植物青藤（Sinomenium acuturn）及毛青藤（Sinamenium acutum）的干燥藤茎，是壮药龙钻通痹方的主要组成药物，能通“龙路”“火路”，临床上多用于治疗类风湿关节炎，且疗效显著。青藤碱是壮药青风藤的主要化合物，具有抗炎、抑制移植物排斥、抗肿瘤以及抑制免疫等药理作用[3]。但对RA患者的血小板的影响机制还不明确。本实验就此现状，望探究出青藤碱在治疗类风湿关节炎的过程中对血小板因子PDGF、PAF表达的影响。
1 材料
1.1 实验动物 SPF级健康（SD）大鼠40只，8～10周龄，雄性，体质量（180±20）g（湖南斯莱克景达，SCXK（湘）2016-002），适应性喂养5天后开始实验。 1.2 材料 青风藤干燥藤茎（购于广西中医药大学第一附属医院，经韦松基鉴定为防己科植物青藤藤茎Sinomenium acuturn）;天然牛Ⅱ型胶原蛋白、完全弗氏佐剂、P-选择素检测试剂盒、PECAM-1检测测试盒购自与南宁市鹏碧实验室器材经营部。
2 方法
2.1 分组与造模 将40只SD大鼠随机分为空白组8只以及造模组32只，将溶于醋酸的牛Ⅱ型胶原蛋白先于4 ℃低温保存过夜，第2 d与完全弗氏佐剂以等体积乳化，乳化成功后，对模型组大鼠背部及尾部多点行皮下注射，诱导类风湿关节炎模型;空白对照组大鼠注射等量0.9%氯化钠溶液[4]。
2.2 造模评分 按照关节指数评分标准对类风湿关节炎模型大鼠进行评分，首次注射后每3 d称重1次，每周固定两名实验员记录关节肿胀评分。
2.3 给药 造模后第21 d进行关节评分，评分>4分即认定为造模成功。成模大鼠随机分为模型组n=8）和青藤碱低剂量组、青藤碱中剂量组、青藤碱高剂量组。分组后开始给药：青藤碱组灌胃给予青藤碱的混悬液，低剂量组给药青藤碱5 mg/kg/d;中剂量组给与10 mg/kg/d;高剂量组给药20 mg/kg/d。模型组与对照组灌胃等量0.9%氯化钠溶液;灌胃剂量按照10 mL/kg/d，每天1次，持续28 d。
2.4 实验取材 造模成功后，行第一次眼眶取血，离心保存血清。第二轮取血于实验结束后;此次取血先禁食一夜，次日于大鼠眼眶取血。ELISA法测定血清中PDGF、PAF水平，操作方法严格按试剂盒说明书操作。
3 结果
3.1 各组大鼠足关节指数的变化 造模后，大鼠多关节肿胀明显，并伴有明显红肿;给药后，大鼠关节明显好转。给药第7、14、21 d时，壮药青藤碱高剂量组足关节指数评分明显低于模型组P<0.05），第28 d显著低于模型组P<0.01）;给药第7、14、21、28 d，壮药青藤碱中剂量组关节指数明显下降，关节肿胀改善情况优于模型组P<0.05）;给药第14、21、28 d，壮药青藤碱低剂量组关节指数下降，关节肿胀改善情况优于模型组P<0.05）。见表1。
3.2 各组大鼠血清PDGF、PAF的表达情况 给药后，壮药青藤碱高剂量组和空白组大鼠血清PDGF、PAF的表达显著下降，且低于模型组P<0.01）;壮药青藤碱中、低剂量组大鼠血清PDGF、PAF的表达明显下降，且低于模型组P<0.05）。见表2。
4 讨论
RA在我国的发病率仅约为0.35%，但由于我国人口基数大，患病总人数超500万，严重影响人民身心健康，甚至在某些地区，患者中存在很高的抑郁率，给患者家庭和社会带来了巨大负担。类风湿关节炎的发病和多种炎症因子相关，如肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、IL-4[5]、IL-6、IL-17[6]、IL-10、IL-1[7]、IL-1β[8]等。董文哲等[9]研究发现，血细胞血小板的计数变化和RA的关系尤为密切，血小板的激活和类风湿关节炎的炎症反应呈正相关;而血小板的激活必然会分泌PDGF和PAF，导致PDGF和PAF在类风湿关节炎炎性反应中呈现高表达[10]。
壮医认为，RA属于壮医“发旺”（壮名：Fungcaep）范畴。该病的主要发病机理为风、寒、湿、热等毒邪乘虚侵入人体，阻滞“龙路” “火路”，使气血运行不畅，痹阻于筋骨肌肉、关节所致;治疗当祛风除湿，行气消肿止痛。壮药龙钻通痹方是壮医治疗活动期RA的经验方，该方遵循壮医主帮配伍的组方原则。由飞龙掌血、大钻、八角枫、两面针、青风藤、九龙藤等组成，能疏通“龙路”“火路”之瘀滞，直接祛邪外出，恢复天、人、地三气的同步运行，从而达到治疗目的。
青藤碱是壮药青风藤治疗类风湿关节炎主要有效的化学成分，现代临床及实验发现，青藤碱治疗类风湿关节炎的临床效果显著，对类风湿发病过程中的各种炎性因子都有一定的影响。如能降低细胞因子IL-1、IL-6[14]、IL-1、IL-17[15]、TNF-α等的表达;还能上调IL-4[16]的表达，从而减轻类风湿关节炎的滑膜增生和骨破坏。但是对类风湿关节炎发病过程中血小板的影响情况却研究不多。
本实验发现，青藤碱对类风湿关节炎模型大鼠的血小板因子PDGF和PAF有抑制作用，并能有效缓解大鼠关节肿胀，达到治疗类风湿关节炎的效果。但在药物浓度上有一定的要求。
参考文献
[1]杨爽，彭兰驭，牟茂婷，等.类风湿关节炎的治疗进展[J].世界最新医学信息文摘，2018，18（A2）：115-116.
[2]錢鑫，赵智明，张蓓蓓，等.青藤碱对类风湿关节炎患者炎性细胞因子及免疫系统的影响[J].中药材，2018，41（5）：1226-1228.
[3]秦峰， 蔡辉.青藤碱药理作用研究进展[J].现代中药研究与实践， 2016， 30 （4） ：81-86.
[4]刘佳维，李艳彦，王永辉.类风湿关节炎的实验动物模型研究进展[J].世界最新医学信息文摘，2016，16（64）：35-36.
[5]刘金星，胡琼，丁宁，等.针刺对类风湿性关节炎小鼠血清IL-4和TNF-α的影响[J].亚太传统医药，2019，15（3）：11-13.
[6]曹艳玲.关于IL-6、IL-17、IL-10与类风湿关节炎活动的相关性分析[J].世界最新医学信息文摘，2018，18（3）：1134.
[7]何奕坤，杨光辉，吕明慧，等.补肾解毒通络方联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎患者血清中IL-1、IL-6、TNF-α的影响[J].辽宁中医杂志，2015，42（8）：1451-1453.
[8]栾仲秋，李秋红，王继坤，等.类风湿性关节炎患者IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23和 IL-33炎性相关因子变化的临床意义[J].解放军预防医学杂志，2019，37（3）：64-65.
[9]董文哲，刘健，忻凌，等.基于数据挖掘的老年类风湿关节炎患者血小板参数变化及关联规则分析[J].中国临床保健杂志，2020，23（1）：52-56.
[10]杨秀丽，黄传兵，贾建云，等.血小板微粒的释放与类风湿关节炎的相关性研究现状[J].风湿病与关节炎，2015，4（6）：61-64.
[11]罗宇东，吴玉强，陈洪涛，等.治疗类风湿关节炎壮药龙钻通痹方的研究进展[J].大众科技，2019，21（6）：76-79.
[12]孙慧慧.壮药龙钻通痹方治疗类风湿关节炎多药耐药的疗效评估[J].壮瑶药研究，2019（1）：72-76.
[13]田照，庞宇舟，袁德培，等.壮药龙钻通痹方影响类风湿关节炎大鼠成骨细胞转录因子Smad5的时序性分析[J].中国老年学杂志，2019，39（21）：5307-5311.
[14]赵静，刘伟伟，李雪萍，等.青藤碱对佐剂诱导性关节炎模型大鼠炎症相关因子表达的影响[J].重庆医学，2018，47（7）：879-882.
[15]周彬，周迎莉，林为民，等.青藤碱联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎患者IL-1，IL-17和TNF-α表达的影响[J].现代中西医结合杂志，2014，23（19）：2066-2068.
[16]高晨鑫，张湛明，陈继红，等.青藤碱对类风湿关节炎细胞因子影响的研究进展[J].风湿病与关节炎，2017，6（2）：72-75.
（收稿日期：2020-06-09 编辑：程鹏飞）
基金项目：国家自然科学基金资助项目（编号：81973976）;壮瑶药协同创新中心（桂教科研〔2013〕20号）;广西一流学科建设项目（编号：桂教科研[2018]12）。
作者简介：曹知勇（1994-），男，土家族，硕士研究生在读，研究方向为民族医药、中医疑难杂病。E-mail：caozhiyong2019@163.com
通信作者：庞宇舟（1963-），男，汉族，硕士，教授，博士研究生导师，研究方向为民族医药、中医内科。E-mail：2017yuzhoupang@sina.com