【摘 要】
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目的 构建含HIV-1 B亚型中国株gagV3基因的DNA疫苗及重组腺病毒伴随病毒(rAAV)疫苗,并研究DNA疫苗和rAAV联合免疫的免疫效果.方法将HIV-1 B亚型中国株gagV3基因克隆入真核表达载体pCI-neo上,构建了含HIV-1 gagV3基因的DNA疫苗pCI-gagV3.采用电击法将pCI-gagV3质粒转染p815细胞,用G418压力筛选,得到转入重组质粒的细胞系p815-g
【机 构】
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100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肿瘤病毒与艾滋病室,100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肿瘤病毒与艾滋病室,100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预
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目的 构建含HIV-1 B亚型中国株gagV3基因的DNA疫苗及重组腺病毒伴随病毒(rAAV)疫苗,并研究DNA疫苗和rAAV联合免疫的免疫效果.方法将HIV-1 B亚型中国株gagV3基因克隆入真核表达载体pCI-neo上,构建了含HIV-1 gagV3基因的DNA疫苗pCI-gagV3.采用电击法将pCI-gagV3质粒转染p815细胞,用G418压力筛选,得到转入重组质粒的细胞系p815-gagV3,用免疫酶法检测细胞系中HIV-1基因的表达.用该DNA疫苗进行小鼠免疫实验,检测免疫效果;用该DNA疫苗初次免疫,含同样gagV3基因的重组腺病毒伴随病毒rAAV-gagV3加强免疫,采用免疫酶法检测免疫小鼠血清中HIV-1特异性的抗体水平,用乳酸脱氢酶法检测免疫小鼠的HIV-1特异性CTL水平. 结果 pCI-gagV3可以在p815细胞中表达HIV-1的基因,免疫BALB/c小鼠后可以在小鼠体内诱发HIV-1特异性的细胞和体液免疫反应.HIV-1特异性抗体滴度为1∶20;效靶比为50∶1时,CTL平均杀伤率为41.7%.pCI-gagV3与rAAV-gagV3联合免疫并不能明显提高抗体水平,但可以提高CTL反应,效靶比为50∶1时,CTL平均杀伤率为61.3%,高于单独用DNA疫苗或重组AAV疫苗免疫后产生的CTL活性.结论 DNA疫苗与重组腺病毒伴随病毒联合免疫可以提高免疫小鼠产生的HIV-1特异性CTL反应。
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