利用CRISPR-Cas9系统进行水稻OsMADS15基因的定向编辑

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CRISPR-Cas9系统的发现和应用为快速、定向的植物基因组编辑、突变体创制和开展植物功能基因组研究提供了新的技术工具。在本研究中,我们利用CRISPR-Cas9系统,对水稻A类MADS-box转录基因Os MADS15进行定点基因组编辑。结果显示,该体系在T0代即获得3个不同的9522Osmads15双等位突变株系:株系9522Osmads15-1等位1在靶点缺失1个碱基A,等位2在靶点缺失3个碱基ACA;株系9522Osmads15-2等位1在靶点缺失5个碱基CAACA,等位2在靶点缺失3个碱基CAA;株系9522Osmads15-3等位1在靶点缺失1个碱基A;等位2发生了大片段的替换。所有株系等位1的突变均造成了开放阅读框移码,导致翻译提前终止;等位2的突变也使氨基酸序列发生不同程度的变化。初步的表型分析显示,9522Osmads15突变体小穗不育外稃变长如叶状,并表现出生殖生长向营养生长的转变;与已报道的中籼3037dep突变体表型不同,除9522Osmads15-2株系外,其他2个株系内稃及生殖器官也有向叶片转换的趋势。q RT-PCR分析显示,3个突变株系的Os MADS15转录本水平显著降低。因此,本研究对Os MADS15基因第一外显子区域的靶点进行了高效的定点编辑,获得的9522Osmads15突变体为进一步开展OsMADS15调控水稻小穗发育的遗传学和调控网络研究提供了新的遗传材料。
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