【摘 要】
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为研究生肌素在染色质重建过程中的作用,采用生肌素真核表达载体转染C2C12肌细胞,细胞核经微球菌核酸酶消化后,提取DNA进行SDS-PAGE分析.生肌素转染的细胞,其核小体(染色质)
【机 构】
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北京大学医学部生物化学与分子生物学系
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为研究生肌素在染色质重建过程中的作用,采用生肌素真核表达载体转染C2C12肌细胞,细胞核经微球菌核酸酶消化后,提取DNA进行SDS-PAGE分析.生肌素转染的细胞,其核小体(染色质)在Mg2+溶液中的溶解性明显增加,提示染色质组蛋白乙酰化程度提高.组蛋白经TAU-SDS(2-D)双相凝胶电泳分析,发现在转染生肌素真核表达载体24 h后,组蛋白H4的乙酰化修饰程度最高.采用抗乙酰化组蛋白H3和H4抗体进行的Western印迹分析进一步证明了乙酰化的发生.上述变化与染色质的活跃程度相关.RT-PCR结果显示,生肌素的靶基因烟碱样乙酰胆碱受体(nAChR)α亚基和肌酸激酶(MCK)基因在转染后表达水平提高.结果提示,强制性表达外源性生肌素可引起肌细胞核染色质重建,进而激活靶基因.
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