人牙髓细胞内皮向分化中 miRNA 的表达及生物信息学分析

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目的研究人牙髓细胞内皮向分化时差异表达的微小RNA( microRNA,miRNA)并进行生物信息学分析,初步探讨miRNA在人牙髓细胞内皮向分化中的作用。方法以添加50μg/L血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor ,bFGF)和2%胎牛血清的培养基培养人牙髓细胞7 d为诱导组,以未诱导的人牙髓细胞为对照组,实时荧光定量PCR检测血管内皮标志基因血小板-内皮细胞黏附分子( CD31)、冯·维勒布兰德因子( von Willebrand factor , vWF )和血管内皮细胞钙黏着蛋白( vascular endothelial-cadherin,VE-cad)的表达;体外成管实验检测诱导后细胞的成管能力;通过miRNA表达谱芯片检测miRNA的表达并采用实时荧光定量PCR进行验证;运用生物信息学软件预测差异表达miRNA调节的靶基因及可能涉及的生物学功能和信号通路。结果实时荧光定量PCR结果显示,CD31、vWF和VE-cad在对照组牙髓细胞中的相对表达量分别为(3.48±0.22)×10-4、(3.13±0.31)×10-4和(39.60±2.36)×10-4,而在诱导组的相对表达量则分别为(19.57±2.20)×10-4、(48.13±0.54)×10-4及(228.00±8.89)×10-4,3种基因在诱导组的表达均较对照组显著上调(P<0.05);成管实验显示,诱导后细胞在基质胶上可形成类似小管样结构;基因芯片结果显示,人牙髓细胞内皮向诱导后差异表达的miRNA有47个,其中15个miRNA表达上调,32个miRNA表达下调;实时荧光定量PCR对上述部分差异表达miRNA的验证结果与芯片结果基本一致;生物信息学分析显示,上述差异表达miRNA的靶基因显著富集于转录调控、细胞运动、血管形态、血管新生和细胞骨架蛋白等生物学功能,且与丝裂原活化蛋白激酶通路和Wnt通路等信号通路有关。结论人牙髓细胞内皮向诱导后存在miRNA的差异表达,为牙髓细胞的分化机制和牙髓血管新生提供新的思路。
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