【摘 要】
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目的 对人防御素5(HD-5)基因进行克隆,构建真核表达载体HD5-pPICZαA.方法 从人cDNA文库中PCR扩增HD-5基因片段,用EcoR I和Xba I分别双酶切HD-5基因扩增产物和毕赤酵母表达载
【机 构】
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辽宁医学院附属第一医院普外科,辽宁医学院附属第一医院肿瘤科,辽宁医学院免疫与病原生物学教研室
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目的 对人防御素5(HD-5)基因进行克隆,构建真核表达载体HD5-pPICZαA.方法 从人cDNA文库中PCR扩增HD-5基因片段,用EcoR I和Xba I分别双酶切HD-5基因扩增产物和毕赤酵母表达载体pPICZαA,用T4DNA连接酶连接目的 基因片段和pPICZαA,然后转化到E.coil Top10中,Zeocin筛选转化子并进行PCR、酶切和序列鉴定.结果 提取阳性克隆的重组质粒,EeoR I和xba I双酶切后跑电泳获得预期条带;同时重组质粒经序列测定,证实HD-5基因正确插入pPICZαA中,插入位置、方向均正确.结论 成功构建人防御素5基因的真核表达载体HD5-pPICZαA,为HD-5蛋白的真核真核表达奠定基础.
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