【摘 要】
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本研究提取平菇菌丝球总RNA作为模板,通过反转录PCR获得高丝氨酸乙酰基转移酶基因(homoserine acetyltransferase gene,hta)。经ExPAS-ProtParam tool、PSIPRED、SWISS-MODEL
【机 构】
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华南农业大学食品学院生物工程系,广东省微生态制剂工程技术研究中心
【基金项目】
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广东省科技计划金项目(粤港联合创新领域2014B050505018);广东省现代农业产业体系岗位专家(2017LM1125,2017LM1126)
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本研究提取平菇菌丝球总RNA作为模板,通过反转录PCR获得高丝氨酸乙酰基转移酶基因(homoserine acetyltransferase gene,hta)。经ExPAS-ProtParam tool、PSIPRED、SWISS-MODEL等软件分析,该基因编码的多肽由445个氨基酸组成,等电点为5.93,二级结构主要有螺旋、无规则卷曲和延伸链。利用酶切连接法构建含hta基因的表达载体pET32a-hta,并转化至大肠杆菌BL21。SDS-PAGE分析表明,IPTG终浓度为0.2 mmol/L,诱导温度为25℃,诱导时间为16 h时,工程菌BL21/pET32a-hta的可溶性高丝氨酸乙酰基转移酶(HTA)表达量最高。将表达载体pET32a-hta和p ET22b-hta分别转入大肠杆菌工程菌Rosetta、Origami B和Rosetta gami plysS,探究该酶在不同载体及宿主组合中的表达情况。HPLC结果表明,当表达载体为pET32a-hta,表达宿主为Rosetta时,工程菌Rosetta/pET32a-hta诱导表达的HTA比活力最高,其最高比活力为2.2 m U/mg。
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