【摘 要】
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表达O型口蹄疫病毒VP1蛋白,用于O型口蹄疫病毒的检测.以质粒T234/FMDV为模板,PCR扩增VP1基因片段,构建重组质粒pET-41b/VP1,转化表达菌BL21(DE3),IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳
【机 构】
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河南师范大学生命科学学院,河南新乡,453007郑州职业技术学院,河南郑州,450121;河南师范大学生命科学学院,河南新乡,453007;河南省生物工程技术研究中心,河南郑州,450001;
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表达O型口蹄疫病毒VP1蛋白,用于O型口蹄疫病毒的检测.以质粒T234/FMDV为模板,PCR扩增VP1基因片段,构建重组质粒pET-41b/VP1,转化表达菌BL21(DE3),IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot进行分析检测,目的蛋白经镍离子亲和层析纯化,以纯化的目的蛋白包被,建立了间接VP1-ELISA检测方法.VP1基因表达的蛋白主要以包涵体形式存在,复性后具有免疫反应性,方阵滴定法确定了包被抗原的最佳工作浓度(1 mg/L),最佳的酶结合稀释度为1:8 000,检测结果特异性好.O型口蹄疫病毒VPl基因可在表达载体pET-41b中表达,并建立了O型口蹄疫病毒检测方法.
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