【摘 要】
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目的 探究miR-135b靶向糖原合成酶激酶3B(glycogen synthase kinase 3B,GSK3B)对地塞米松诱导的成骨细胞(MC3T3-E1)凋亡的影响.方法 CCK8检测地塞米松对MC3T3-E1细胞活力的影响,筛选最适地塞米松浓度进行后续实验.流式细胞术检测细胞凋亡,RT-qPCR检测miR-135b和GSK3B表达,荧光素酶报告实验验证miR-135b和GSK3B靶向作用关系.细胞实验分为对照组(Control)、地塞米松组(Dex)、阴性对照mimics组(mimics NC)
【机 构】
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天津医科大学研究生院,天津300070;天津医院骨科,天津361000
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目的 探究miR-135b靶向糖原合成酶激酶3B(glycogen synthase kinase 3B,GSK3B)对地塞米松诱导的成骨细胞(MC3T3-E1)凋亡的影响.方法 CCK8检测地塞米松对MC3T3-E1细胞活力的影响,筛选最适地塞米松浓度进行后续实验.流式细胞术检测细胞凋亡,RT-qPCR检测miR-135b和GSK3B表达,荧光素酶报告实验验证miR-135b和GSK3B靶向作用关系.细胞实验分为对照组(Control)、地塞米松组(Dex)、阴性对照mimics组(mimics NC)、miR-135b组、miR-135b+糖原合成酶激酶3B组(miR-135b+pc-GSK3B).蛋白印迹检测蛋白表达.结果 与对照组比较,Dex组细胞凋亡增加,并且miR-135b表达下降,GSK3B表达升高,荧光素酶报告实验显示,miR-135b和GSK3B存在靶向作用关系.与Dex组比较,miR-135b组细胞凋亡减少,同时GSK3B、Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白水平下降,Bcl-2蛋白水平升高,与miR-135b组比较,miR-135b+pc-GSK3B组细胞凋亡增加,同时GSK3B、Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低.结论 miR-135b可通过靶向作用于GSK3B,抑制地塞米松诱导的成骨细胞凋亡,这一作用与其对Bax/Bcl-2表达和caspase-3/9活化的调控有关.
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