【摘 要】
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目的:构建人程序性死亡配体1(PD-L1)重组质粒载体,筛选稳定高表达人PD-L1的结肠癌单克隆细胞株。方法:提取HCT116细胞总RNA,RT-PCR克隆PD-L1基因片段,将其重组至含有HA标签和
【机 构】
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第三军医大学野战外科研究所大坪医院病理科,第三军医大学野战外科研究所大坪医院野战外科研究所一室
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目的:构建人程序性死亡配体1(PD-L1)重组质粒载体,筛选稳定高表达人PD-L1的结肠癌单克隆细胞株。方法:提取HCT116细胞总RNA,RT-PCR克隆PD-L1基因片段,将其重组至含有HA标签和Neo真核细胞筛选抗性的pcDNA3质粒载体上,转染HCT116细胞,倍比稀释8个细胞浓度至96孔板,G418筛选两周,挑取单细胞克隆,通过免疫印迹鉴定外源性PD-L1的表达;通过MTS、Transwell和软琼脂细胞克隆形成实验比较PD-L1低表达和高表达单克隆细胞株生长增殖、迁移和细胞克隆形成能力的差别;
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